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《西南政法大学司法鉴定中心 作业指导书》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、西南政法大学司法鉴定中心作业指导书文件编号FSC07—TD—M-2页号第1页共9页版次第一版第1次修改标题STR与性别位点基因型检测审核人王旭东批准人易旻发布日期2008年11月18日1．目的通过对D3S1358等STR位点的基因型检测，进行亲子鉴定和个体识别。2．适用范围本作业指导书适用于法医物证学实验室对刑事、民事以及非诉讼案件中人体血液（斑）、羊水、带毛囊毛发、混合斑、精斑、组织等生物学检材的DNA基因型检验以及性别位点的检测。3．职责中心主任批准具有法医物证鉴定资格的鉴定人履行此项工作。
2、4．试剂本法所用试剂为分析纯，在有效期内使用；使用pH试纸测定溶液的pH值。4.110mg/ml蛋白酶K：lmg蛋白酶K溶于100μl双蒸水中，每管30μl分装，冰箱冻存。4.2lmol/LDTT：称取0.77gDTT，加入5ml双蒸水，溶解后加入50μllmol/lNaAc(pH5.2)，混匀。4.3Chelex100(50-100mesh)：5gChelex100加双蒸水至50ml，检查pH为9-11。4.40.5mol/LEDTA：于800ml双蒸水中加入186.1gNa2EDTA-2H2
3、O，在磁力搅拌器上搅拌溶解（可加20gNaOH助溶，此时pH=8.0士0.2)。检查pH，用水定容至1L。4.5Powerplex16System扩增试剂盒（Promega公司）：冰箱冻存。4.6GeneScan-600[ILS](Promega公司）：2-6℃保存。4.7POP-4(ABI公司）：2-6℃保存。5．设备仪器5.1310型遗传分析仪。5.29700型PCR扩增仪。5.3振荡器。5.4台式高速离心机。5.5恒温干燥箱。5.6计算机。6．原理从生物学检材中抽提DNA，针对D3S135
4、8,TH01,D21S11,D18S51,PentaE，D5S818,Dl3S317,D7S820,Dl6S539,CSFIPO,PentaD，vWA,D8Sll79,TPOX,FGA等STR位点和性别位点Amelogenin进行复合PCR扩增，将扩增产物进行电泳分析，确立基因型。7．程序7.1DNA提取7.1.1从血样中提取DNA：(1)在1.5ml离心管中加1ml双蒸水，然后加入3μl全血（约9mm2血斑），小心混匀；西南政法大学司法鉴定中心作业指导书文件编号FSC07—TD—M-2页号第2
5、页共9页版次第一版第1次修改标题STR与性别位点基因型检测审核人王旭东批准人易旻发布日期2008年11月18日室温保温30min，间歇振荡；(2)10000-15000r/min离心2-3min；小心移去上清液。若样品为血斑，则保留载体；(3)沉淀中加入10%Chelex100(50-100mesh)200μl;56℃保温30min；(4)高速振荡5-10sec;100℃8min；(5)高速振荡5-10sec;10000-15000r/min离心2-3min，取上清液用于PCR扩增；2-8℃保存
6、或冻存剩余DNA。7.1.2从毛发中提取DNA：(1)用三蒸水清洗毛发；剪取毛根部分；放入1.5mlEppendorf管中；(2)加入200μl10%Chelex100(50-100mesh）及2μl10mg/mlPK（蛋白酶K),56℃保温6-8hr或过夜；(3)高速振荡5-10sec；沸水煮8min(注意毛发应浸没于Chelex液）；(4)高速振荡5-10sec；10000-15000r/min离心2-3min；取上清液用于扩增反应，2-8℃保存或冻存剩余DNA。7.1.3从口腔刮拭物样本中
7、提取DNA:(1)用牙签刮拭口腔粘膜，将其放入1.5ml离心管内，加入200μl10%Chelex(50-100mesh)；搅动，使细胞脱落；(2)56℃保温15-30min；(3)高速振荡5-10sec；100℃8min；(4)高速振荡5-10sec,10000-15000r/min离心2-3min；(5)取上清液用于扩增反应；2-8℃保存或冻存剩余DNA。7.1.4从唾液斑中提取DNA：(1)取9mm2唾液斑放入1.5ml离心管中，加1ml三蒸水于室温浸泡30min；(2)用牙签搅动使载体细
8、胞脱离载体，去除载体；10000-15000r/min离心lmin;(3)去上清仅留50μl，用无菌吸头吹打沉淀；加10%Chelex100(50-100mesh）至200μl,56℃保温15-30min;(4)高速振荡5-10sec；100℃8min;(5)高速振荡5-10sec,10000-15000r/min离心2-3min；取上清液用于扩增反应；2-8℃保存或冻存剩余DNA.7.1.5从精液中提取DNA:(1)取3μl精液放入1.5ml离心管内，加入200μl10%Chelex100(5
