食品卫生微生物学检验大肠菌群检查操作程序（可编辑）

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1、大肠菌群检验标准操作程序1大肠菌群1」试剂：月桂基硫酸盐胰蛋白豚(LST)肉汤、煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤、结品紫中性红胆盐琼脂(VRBA)、磷酸盐缓冲液、无菌生理盐水、无菌lmol/LNaOH、无菌lmol/LHCL1.2仪器：冰箱、恒温培养箱、恒温水浴锅、显微镜、均质器或灭菌乳钵、架盘药物天平、灭菌吸管1ml、10ml、灭菌锥形瓶、灭菌玻璃珠、灭菌培养皿、灭菌试管、灭菌刀、剪子、蹑子报告结果2操作：2.1样品的稀释2.1.1固体和半固体样品：以称取25g样品，放入盛有225ml生理盐水或磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内，8000r/min-1OOOOr/min的均质l・2m

2、in,或放入盛有225ml生理盐水或磷酸盐缓冲液的无菌均质袋屮，用拍击式均质器拍打1・2分钟，做成1：10的均匀稀释液。2.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品置盛冇225ml生理盐水或磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）屮，充分混匀，制成1：10的样品匀液。2.1.3样品匀液的PH值应不6.5-7.5Z间，必耍时分别用Imol/LNaOH或1mol/LHCL调节。2.1.4用1ml灭菌吸管或微量移液管理吸取1：10样品匀液lml,沿管壁缓缓注入注入9ml牛理盐水或磷酸盐缓冲液的无菌试管屮（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用一支l

3、ml无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。2.1.5根据对样品污染情况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀淮。每递增稀释1次，换用一支lml无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15分钟。2.2初发酵试验221每个样品，选择三个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐蛋白月东（LST）肉汤，每管接种lml（如接种量超过lml,则用双料LST肉汤），36°C±1°C培养24h±2h,观察倒管内是否有气泡产生，24h±2h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48h±2h,产气

4、者进行复发酵试验。未产气都为大肠杆菌阴性。2.3复发酵试验2.3.1用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36°C±1°C培养48h±2h,观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。2.4大肠菌群最可能数（MPN）的报告2.4.1按确证的大肠菌群LST阳性管数，检萦MPN表，报告每g(ml)样品中大肠菌群的MPN值。(见下表)大肠菌群最可能数(MPN)检索表阳性管数MPN95%可信限阳性管数MPN95%可信限0.100.010.001下限上限0.10.010.001下限上限000<30—9.5220214.5420013.(

5、)0.159.6221288.7940103.00.1511222358.7940116.11.218230298.7940206.21.218231368.7940309.43.638300234.6941003.60.1718301388.71101017.21.318302641718()102113.6383104391801107.41.3203117517200111113.63831212037420120113.64231316040420121154.5423209318420130164.542321150374202009.21.43832221040

6、430201143.642323290901000202204.542330240421000210153.742331460902000211204.5423321100180410021227&794333>11(X)420注1：本表采用3个稀释度0」ml(g)、0.01ml(g)、0.001ml(g),每稀释度接种三管注2：表内所列检样量如改有1ml(g)、0.1ml(g)、0.01ml(g)时，表内数字应相应降低10倍；如改用0.01ml(g)、0.001ml(g)、0.0001ml(g)时，则表内数字应相应增加1()倍。其余可类推。