GB 4789.3-1994 食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定

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1、中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验GB4789.3一94大肠菌群测定代替GB4789.3-84MicrobiologiclexaminationoffoodhygieneDetectionofColiJormbacteria1主题内容与适用范围本标准规定了食品中大肠菌群的测定方法。本标准适用于食品中大肠菌群的测定。2术语大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。3

2、31用标准GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂4设备和材料4.1温箱:36士10C。4.2冰箱。-4'C.4.3恒温水浴:44.5士。5℃。4.4天平。4.5显微镜。4.6均质器或乳钵。车了平皿:直径为90mm.4.8试管。4.9吸管。4.10广口瓶或三角烧瓶:容量为500mLo4.们玻璃珠:直径约5mm,4.12载玻片。4.13酒精灯。4.14试管架。中华人民共和国卫生部1994一03一18批准1994一09一01实施GB4789.3一945培养墓和试荆5.1乳搪胆盐发酵管:按GB4789.28中4.9规定。5.2伊红美蓝琼脂平板:按GB4789.28中4

3、.25规定。5.3乳糖发醉管:按GB4789.28中4.10规定。5.4EC肉汤:按GB4789.28中4.11规定。5.5磷酸盐缓冲稀释液:按GB4789.28中3.22规定。5.6生理盐水。5.7革兰氏染色液:按GB4789.28中2.2规定。6检验程序大肠菌群检验程序如下:7操作步骏了.1检样稀释7.1.1以无菌操作将检样25mL(或9)放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内GB4789.3一94(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器，以8000^-10000r/min的速度处理1min，做

4、成1:10的均匀稀释液。7.1.2用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1:100的稀释液。7.1.3另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。7.1.4根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。了.2乳糖发酵试验将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管>1mL及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36士1'C温箱内，培养24士2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则

5、可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。了.3分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36110C温箱内，培养18^-24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。7.4证实试验在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1^"2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36士10C温箱内培养24士2h、观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。了.5报告根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值。8龚大肠菌群(faecalcoliform)8.，用接种环将所有产气的乳搪

6、胆盐发酵管培养物(见7.2条)转种于EC肉汤管内，置44.5士。.2"C水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面)。培养24士2h,经培养后，如所有EC肉汤管均不产气，则可报告为阴性;如有产气者，则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，置36士1℃培养1824h,凡平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。8.2结果报告根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)粪大肠菌群的MPN值。大肠菌群最可能数(MPN)检索表阳性管数MPN95%可信限100mL(g)1mL(g)X30.1mL(g)X30.01-L(g)X3下限上限000<300

7、0130<590002600039001030<513001I6001290013120GB4789.3一94续表阳性管数MPN96%可信限1mL(g)X30.1mL(g)X30.01-L(g)X3100-L(g)下限上限0206002190022120023160030900311300321600331901004010170G105:::10211010315011070111110:::::11215011319012011030360121150122200123240