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1、端粒酶检测的研究进展丁霖，钱若灿，林曼菲(南京大学化学化工学院，南京，210093)摘要：端粒酶是-•种核糖核蛋口复合物，莫作丿U相当于端粒末端转移酶，利川白身RNA为模板，在端粒末端添加TTAGGG重复片段。近年来，端粒酶的研究已成为热点，由于其在大部分肿瘤细胞中髙表达，与肿瘤细胞的持续分裂密切相关，因此端粒酶的髙灵帧、髙特异牲检测对癌症的早期发现、监测、预后和靶向药物筛选有重大意义。本文主要评述了端粒酶检测方面的研究进展，介绍了无需PCR的检测端粒酶活性的最新方法，也就端粒酶研究的前景进行了展望。关键词
2、：分析化学；端粒酶；检测；肿瘤屮图分类号：0657RecentadvancesindetectionstrategiesfortelomeraseactivityDINGLin,QIANRuocan,LINManfei(SchoolofChemistry&ChemicalEngineering,NanjingUniversity,Nanjing,210093)Abstract:Telomerase,aribonucleoproteincomplex,isatelomereterminaltransferas
3、ethatcanaddTTAGGGrepeatsontelomeresusingitsintrinsicRNAasthetemplate.Inrecentyears,telomerasehasbecomearesearchhotspotduetoitshighactivityinmosttypesofcancercellsanditsclosecorrelationwiththecontinuousdivisionofcancercells・Therefore,highlysensitiveandselec
4、tivedetectionoftelomeraseiscnicialforcancerdiagnosis,monitoring,prognosisandtargeteddnigscreening.ThisreviewintroducestheresearchprogressontelomeraseanalysisandhighlightedsomeofthelatestPCR-freedetectionmethods・Meanwhile,wealsogiveadiscussiononthefuturedir
5、ectionsoftelomeraseanalysisresearch.Keywords:analyticalchemistry;telomerase;detection;cancer0引言恶性肿瘤可导致其周边组织生长失控及远程侵袭转移，已成为威胁人类健康的主要疾病因此发展肿瘤的早期检测方法对于癌症预防和治疗都具有巫要积极意义⑴。DNA,RNA和蛋白质等町以作为肿瘤标志物，近年来受到广泛关注和研究。而端粒和端粒酶的发现，为理解肿瘤机理、提出新的肿瘤标志物和治疗靶标提供了新的维度［2］。细胞分裂引起细胞衰老，
6、而细胞寿命以细胞的增殖次数來确定［37］。在细胞生长过程中存在一种内在的分子计数机制以控制细胞分裂的终止，而染色体逐渐失去端粒末端就是这样一种重要的计时机制［5.11)0人类端粒末端包含着TTAGGG重复丿芋列，是保持染色体完整和稳定性的重要结构。端粒酶是一种核糖核蛋白F®复合体，主要「IT两部分纽成：端粒酶催化亚单位(humantelomerasereversetransciptase,hTERT)以及端粒RNA(humantelomeraseRNA,hTR)［4］O端粒酶以口身的RNA为模板，逆转录合成
7、端粒DNA帝复序列并将•其添加到端粒末端，从而实现端粒长度稳定，并且保持染色体的相对恒定【⑴。在止常的人体细胞中，端粒酶的活性受到相当严密的调控，只有生殖细胞、造血干细胞等不断分裂的细胞才表现出端粒酶活性g。而在肿瘤细胞中，端粒酶的活性被激活，通过基金项H：教育部博士点基金新教师基金项H(20100091120034)作者简介：丁霖(1981年生),女，副教授,主要研究方向:生物分析化学.dinglin@nju.edu.cn逆转录來维持端粒的长度，从而实现肿瘤的无限分裂能力［⑵。例如，人类肿瘤细胞株普遍具冇
8、端粒酶活性，包括85〜90%的原发性肿瘤z，在有转移倾向的癌细胞组织中也可检测到端粒酶的髙表达。正常组织细胞屮和肿瘤细胞端粒酶活性的不同，是诊断和预测癌症的重要依据，因而发展高灵敏的端粒酶活性检测方法对丁•癌症的早期诊断和治疗具有重耍意义。1端粒酶活性的传统检测方法1.1端粒重复序列延仲法Morin在1989年最早建立了端粒1E复序列延伸法冋，在人Hela肿瘤细胞中检测到了端粒酶的活性。这种方法以寡核昔酸作为端粒
