毕业论文（设计）-海南石斛兰黑点病的病原鉴定

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1、题目:学号:姓名:年级:学院:系别:专业:指导教师:完成FI期:海南石斛兰黑点病的病原鉴定海南大学毕业论文（设计）B07120422007级环境与植物保护学院农产品质量与安全系农产品质量与安全副教授2011年05月10日摘要木文研究的三亚地区石斛兰黑点病是一种真菌性病害。病斑多发生于叶端及叶缘，发病初期在叶片上产生针尖大黑色小点。后期病斑逐渐扩展成圆形大斑。病斑屮间深褐色，边缘黑色或暗黑色。发生在叶缘的病斑常互相融合成不规则条形斑。严重时，叶片会局部坏死或整叶枯死。本试验对石斛兰黑点病的病原菌进行分离纯化，再

2、根据柯赫氏法则进行接种实验发现该分离物能引致与DO间石斛兰病害和似的症状。提取病原菌菌丝DNA后应用rDNA-lTS序列分析鉴定，并随之进行同源性分析后发现菌株与Phyllostictasp.的同源性为100%,表明石斛兰黑点病的病原菌为叶点寄属〈Phyllosticta）。I大I此，本研究为该病害的科学防治提供了一定的指导意义。关键词：石斛兰；黑点病；病原鉴定；叶点霉属AbstractBlackspotdiseaseisoneoftheimportantplantdiseaseofthedendrobium

3、inSanya,Hainan.Thediseaseisbelongingtoafungaldiseaseandoccursattheedgeofleafmainly.Atfirst,thesizeofdiseasespotisverysmallanditscolorisblack.Later,thediseasespotexpandsintoalarge,roundspotgradually.Thecolorofcentraldiseasespotisdarkbrown,whiletheedge'scolor

4、isblackordarkblack.Diseasespotoccuringattheedgeofleafformedintoirregularstripe.Whenitwasserious,someleavesdiedpartlyorintegrally.Duringexperiment,wegotthepathogencomingfrominfectedleavesthroughtheprocessofseparationandpurification.Andthen,wecultivatedpathog

5、enonthePDA.AccordingtotheKoch'sRule,weinoculatedtheseparatedpathogentothetenderleaves.Afteraperiodoftime,wefoundthatpathogencancausethesamekindofsymptomontheleavescomparedwiththepreviousobserveationinthefield-ThroughthepathogenDNAcxtractionjDNA-ITSSequencea

6、nalysisandallogenicanalysis,wefoundthatthebacterialstrainissimilartoPhyllostictasp.completely.TheaboveresultdemonstratedthatthepathogenofblackspotdiseaseisPhyllosticta.Atthesametime,itprovidedcertaintheoreticalbasisforthediseasecontrol.Keywords:Dendrobium；b

7、lackspotdisease；pathogenidentification；Phyllosticta目录1前言42材料与方法52.1试验材料52.1.1试验样品52.1.2幽与试剂52.1.3培养基的配制52.1.4相关试剂的配制52.2主要仪器.62.3试验方法62.3.1病原菌的分离与纯化62.3.2病原菌的致病性测定7233病原菌的繁殖培养72.3.4病原菌DNA的提取72.3.5DNA提取产物的检测72.3.6DNA提取产物的PCR82.3.7PCR扩增产物的检测及冋收82.3.8PCR回收产物的连

8、接和转化92.3.9菌液PCR及阳性转化子测序103结果与分析103.1[D间病害症状103.2病害分离菌的培养性状103.3分离物的致病性测定103.4病原菌rDNA-ITS序列分析123.5提质粒电泳检测连接载体结果123.6DNA序列测定及同源性分析结果134结论与讨论13致谢15参考文献161刖吕兰花(Cymbidiumspp.)在植物学上属于单了叶兰科，为多年生草木植物，附生、地生或腐生。