人早孕期蜕膜腺上皮细胞分离、培养与鉴定

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1、人早孕期蜕膜腺上皮细胞分离、培养与鉴定周雯慧，刘永巧，任亮，张元珍(武汉大学中南医院生殖医学中心，武汉430071)摘要：H的：建立一种经济、髙效的人早孕期蜕膜腺上皮细胞分离、培养方法。方法：胶原酶消化蜕膜组织，网筛过滤及差速贴壁法纯化细胞；免疫细胞化学法检测细胞纯度；MTT增殖实验分析细胞体外增殖活力。结果：利用此法可成功体外培养人早孕期蜕膜腺上皮细胞，细胞纯度可达90%以上。结论：此法经济、高效，町获得纯度较高的蜕膜腺上皮细胞。关键词：蜕膜腺上皮细胞：体外培养；细胞鉴定中图分类号:R-331I

2、solation9cultureandidentificationofhumanfirst-trimesterdecidualepitheliacellsZHOUWenhui,LIUYongqiao,RENLiang,ZHANGYuanzhen(ReproductiveMedicineCenter,ZhongnanHospitalofWuhanUniversity,WuHan430071)Abstract:Objective:Toestablishamethodforisolation,purif

3、icationandcultureofhumanfirst-trimesterdecidualepithelialcells(DEC).Methods:Decidualtissuesweredigestedwith0.1%CollagenaseIV.Meshscreenfiltrationanddifferentialadhesionmethodswereusedtoisolateandpurifythecells・Theisolatedcellswereidentifiedbyimmunocyt

4、ochemistrywithvimentinandcytokeratin7.MTTproliferationassaywasemployedtoanalyzetheviabilityofDECinvitro.Results:DECcouldbeisolatedandculturedsuccessfullyinvitrowiththismethod.Thepurityofthecellswasover90%.Conclusion:Anefficientmethodwasestablishedfort

5、heisolationandcultureofhumanfirst-trimesterDEC・Keywords:decidualepithelialcells;cellcultureinvitro;cellidentification0引言母胎界面是母体组织与胎儿成分宜接接触的界面，奸娠过程中，其局部形成特殊的免疫微环境，使携带一半父系抗原的胎儿不被母体免疫系统排斥，维持妊娠宜至足月分娩。蜕膜腺上皮细胞來源于妊娠期子宫蜕膜，是付胎界血的主要功能细胞。它不仅为胚胎发育提供营养，还能通过合成分泌多种细

6、胞因了调节子宫局部免疫微环境'2】。然而长期以来，由于母胎界而细胞组成复杂，分离和原代培养较为困难，有关蜕膜腺上皮细胞的牛物学功能还有许多未解Z谜。本研究拟建立一种仑适的分离、培养方法，获得充足、纯化的人早犷期蜕膜腺上皮细胞，从而为研究母胎免疫调节机理奠定实验基础。1材料与方法1.1材料1.1.1蜕膜组织经武汉大学屮南医院伦理委员会批准及患者木人知情同灣，于妇产科门诊手术室收集基金项目：教育部膊士点新教师基金(200804861050):湖北省H然科学基金创新群体项目(2008CDA008)作者简

7、介：周雯慧，(1978-),女，副主任医师，副教授，主要研究方向为生殖医学和肿瘤免疫。通信联系人：张元珍，(1959・)，女，主任医师，教授，主要研究方向为生殖医学、产前诊断及优生优育.E-mail:zhangyuanzhen@vip.sina.com10例正常虹娠6〜10周蜕膜组织，置于1640培养液屮2小时内送至实验室。1.1.2试剂胎丫血清、DMEM及1640培养液（Gibco公司）；胶原酚IV（Invitrogen公司）；ECM胶（Sigma公司）；鼠抗人角蛋口7单克隆抗体（福州迈新生物技

8、术开发有限公司）；鼠抗人波形蛋白单克隆抗休（北京屮杉金桥生物技术有限公司）；免疫组化试剂盒（福州迈新生物技术开发有限公司）。1.1.2主要设备二氧化碳培养箱；倒置相养显微镜；超净工作台；恒温水浴箱。1.2方法1.2.1蜕膜腺上皮细胞的分离培养蜕膜组织去除血污后分装入小瓶剪碎至糊状（约1伽3）,加入10倍体积0.1%胶原酶IV,置37°C恒温水浴消化1小时收集上清，消化液经100目、300目网筛过滤后，反冲300目网筛2〜3次，反冲液1500rpm离心10分钟，将细胞团重悬于2ml含