基因工程基础应用训练

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1、基因工程基础应用训练・11・下图为利用生物技术获得生物新品种的过程，据图冋答问题。:杆菌的DNA分子;因C基羊转绵:■一I基棉转虫受胞花细目的EcoRl基因EcoRl（1）在基因工程中，A表示,如果直接从苏云金芽池杆菌中获得抗虫基因，①过程使用的酶区别于其他酶的特点是,B表zjO（2）B->D的过程中，若使用的棉花受体细胞为体细胞，⑤表示的生物技术是_O（3）过程②的方法称为,完成过程③的方法有O（4）要确定目的基因（抗虫基因）导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写岀在个体水平上的鉴定过程：2・下表中列岀了儿种限制酶识别序列及其切割位点，图1、

2、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题:限制酶BamHIHindIIIEcoRISmaI识別序列及切割位点G1GATCCCCTAGfGa'agcttTTCGAfAG1AATTCCTTAAfGCCC'GGGGGGACCC外源DNABaraHISmaIHindDI(1)一个图1所示的质粒分子经SmaI切割前后，分别含有个游离的磷酸基团。(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaI酶切位点越多，质粒的热稳定性越(3)用图屮的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaI切割，原因是0(4)与只使用EcoRI相比较，使用BamHI和HindIII两种限制酶同时处理质粒、

3、外源DNA的优点在于可以防止(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入酶。(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了3.；人笊质粒人的生长激素基因①人的生长激素mRNA(7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。结合C重组质粒斗导入大肠杆菌通过微生物培养获取生长激素导入动物细胞通过动物细胞培养获取生长激素愆导入动物体内通过“乳腺生物反应器”获取生长激素(1)过程①采用的方法是,过程②之前需用处理目的基因和质粒。(2)过程③需事先对大肠杆菌用处理

4、，使其处于感受态，接着,从而完成转化过程。(1)过程④动物细胞培养中使用的工具酶是,与植物组织培养的培养基相比，动物细胞培养液中通常需加入o(2)过程⑤一般先将牛长激素基因导入奶牛的,然后进行—再进行胚胎移植，生下转基因牛犊。4・科学家通过探究DNA载体途径的RNA干扰技术抑制端粒酶的活性，从而抑制肿瘤细胞牛长增殖，以寻找一种抑制肿瘤增长的新途径。方法思路：①构建干扰质粒插入针对人体端粒酶逆转录酶亚基(hTERT)的mRNA的干扰序列闲对照质粒PSG—CTR(插入不针对人体任何DNA序列的对照组序列)。②用空质粒PSG(不含目的基因)、干扰质粒PSG-AS和对照质粒分别感

5、染肝癌细胞。③一段时间后观察检测细胞的。计算细胞凋亡率，绘制肝癌细胞生□端粒酶活性■细胞凋亡率感染后的肝癌细胞的生长情况长曲线。结果如下图：0PSG组PSG-CTR组PSG-AS组感染后的肝癌细胞的端粒酶活性及凋亡情况请回答下列问题。(1)完成方法思路中的空格：①；③O(2)在构建质粒时，要将质粒导入大肠杆菌细胞并用培养基进行筛选鉴定，然后再提取。因此，在构建的表达载体质粒上必须含有o(3)端粒酶可以通过以自身的为模板，为原料来合成端粒DNAo(4)分析DNA载体途径的RNA干扰技术能否抑制肿瘤细胞的增殖?Pst1SmaI—EcoRIApaIiiiiiiiiiinrn抗原

6、基因nr质粒PstISmaIEcoB.I含抗原基因的DNA(1)如果用马铃薯发育的某个时期的mRNA反转录产生的片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做马铃薯的。(2)重组质粒中，目的基因的两端还必须有和终止子。用含重组质粒的土壤农杆菌感染植物细胞后，采用技术检测转基因马铃薯的上是否插入了目的基因，同I］寸还要采用技术检测目的基因是否在转基因马铃薯细胞中表达。(3)培育愈伤组织的固体培养基中，除了无机盐、有机营养物质、琼脂、卡那霉素外，还需添加的物质是,添加卡那霉素的作用是。