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《-大肠杆菌检查法标准操作程序（可编辑）》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、1口的：规范大肠杆菌检查操作，保证检验结果准确。2范围：木程序适用于药品大肠杆菌的检杳。3责任者：QC员、QC复核人员、QC主任。4程序：4.1试药与试液除特别注明外，试验中所用的试剂均为分析纯试剂，水为纯化水。4.1.10.9%无菌氯化钠溶液取氯化钠［NaCl］9.0g,加水使溶解成1000ml,121°C灭菌20分钟。4.1.2无菌磷酸盐缓冲溶液(pH7・2)取磷酸氢二钠［Na2HP04•121120］25.8g和磷酸二氢钠［Nall2P04•1120］4.4g,加水使溶解至1000ml,121°C灭菌20分钟。4.1.3a—蔡酚乙醇试液取u—蔡酚6.0
2、g,加无水乙醇溶解使成100mlo4.1.440%氢氧化钾试液取氢氧化钾40g,加水溶解使成100mlo4.1.5靛基质试液取对二甲氨基苯甲醛［C9HllN0］lg,加入95%乙醇［C2H50H］95ml,充分振摇,使完全溶解后，取浓盐酸［HCl］20ml徐徐滴入，边加边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深，置冰箱保存，备用。4.1.6甲基红试液取甲基红［C15H15N302J0.lg,加95%乙醇［C2H50H］300m1与水适量，使溶解,再加水至500ml,即得。4.1.7V-P试液取a-蔡酚［C10H70HJ6.0g,加无水乙醇［C2II50I1］使溶解成1
3、00mlo另取氢氧化钾40.0g,加水使溶解成100mlo分别将试药与各溶剂混合即得。4.1.8革兰染色液4.1.8.1沙黄染液取沙黄0.25g,加95%的乙醇［C2H50H］10ml,使完全溶解后,加水至100ml«STANDARDOPERATINGPROCEDURE部门：题目：大肠杆菌检查法标准操作程序共10页第2页编号：S/S0P/QC-046-0起草：部门审核：质量部审核：批准：实施日期:4.1.8.2结晶紫染液取结晶紫［C25H30ClN3］1.0g,加95%的乙醇［C2H5OH］20ml,使溶解,加1%的草酸镀溶液80ml,混匀。静置48小时使用
4、，置密闭棕色瓶中储存。4.1.8.3碘试液取碘化钾［KI］2.0g,加水3〜5ml使溶解，加入碘片［I2］1.0g,使全部溶解后，加水稀释至300ml,置密闭棕色瓶屮储存。4.1.8.495%乙醇。4.1.9混麝香草酚蓝指示液4.2培养基的种类4.2.1营养肉汤培养基4.2.2营养琼脂培养基4.2.3胆盐乳糖培养基（BL）4.2.44-甲基伞形酮葡糖甘酸培养基（MUG）4.2.5乳糖培养基4.2.65%乳糖培养基4.2.7蛋白H东水培养基4.2.8磷酸盐葡萄糖豚水培养基4.2.9枸橡酸盐培养基4.2.10曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB）4.3对照用菌液取大肠杆
5、菌［CMCC（B）44102］的营养琼脂斜面培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基内，36±1°C培养18〜24小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至1:106,使对照菌液加入量含菌50〜100个（一般用量为0.lml）,其菌数在做阳性对照的同时用营养琼脂注皿或平板涂布，经培养后计数确定。4.4仪器与设备4.4.1菌检室。4.4.2净化工作台，恒温培养箱（36±1°C）,微波炉，恒温水浴（45±1°C）,高压蒸汽灭菌器，电冰箱，匀浆仪，离心机（500〜4000转/分钟），显微镜（1500STANDARDOPERATINGPROCEDURE部门：题目：大肠杆菌
6、检查法标准操作程序共10页第3页编号：S/S0P/QC-046-0起草：部门审核：质量部审核：批准：实施日期:倍），紫外灯（366nm）o4.4.3薄膜过滤装置：微孔滤膜直径约50mm,孔径0.45±0.02Mmo8.4锥形瓶（250〜300ml,内装玻璃珠若干），研钵（陶瓷制，直径10〜12cm）、培养皿（9cm）,量筒（100ml）,试管（18x180mm）及塞，吸管（1ml分度0.01,10ml分度0.1）,注射器（20ml或30ml）,注射针头，载玻片,盖玻片、玻璃消毒缸（带盖）。4.4.4玻璃器血用前应洗涤干净，无残留抗菌物质。吸管口上端距0.5c
7、n】处塞入约2cni的适宜疏松棉花，置吸管桶内或牛皮纸袋屮。锥形瓶、量筒、试管均应加棉塞或硅胶塞，若用振荡器制备混悬液时，诃需用玻璃纸包裹瓶塞，以免振荡时供试液污染瓶塞，再用牛皮纸包扎。玻璃器皿，均于160°C干热灭菌2小时或高压蒸汽121°C灭菌30分钟,烘干备用。4.4.5大、小橡皮乳头（放于干净带盖的容器屮，并应定期用70〜75%乙醇溶液浸泡）。4.4.6无菌衣、帽、口罩、手套。洗净后配套，用牛皮纸包严，灭菌，备用。4.4.7接种环（口錶金或银銘合金，环径4~5nini、长度6~10cm）,乙醇灯，乙醇棉球或碘伏棉球，灭菌剪刀或灭菌手术刀和灭菌蹑子，灭
8、菌钢锥，灭菌称样纸，不锈钢药匙，试管架，火柴，记号笔
