影响革兰氏染色结果的原因分析

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1、ＩＳＳＮ１００２－４９５６实验技术与管理第２８卷第５期２０１１年５月ＣＮ１１－２０３４／ＴＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＭａｎａｇｅｍｅｎｔＶｏｌ．２８Ｎｏ．５Ｍａｙ．２０１１影响革兰氏染色结果的原因分析洪庆华１，迟杰１，齐云１，孙浩２（１．天津大学环境科学与工程学院，天津３０００７２；２．天津大学人事处，天津３０００７２）摘要：为了提高革兰氏染色实验的教学效果，应用革兰氏染色法，探讨了菌种的菌龄、细菌涂片厚度、碘液媒染时间和乙醇脱色时间对革兰氏染色结果的影响。实验结果表明获得正确染色

2、结果的条件为：首先将大肠杆菌、枯草芽胞杆菌和金色葡萄球菌在琼脂斜面培养基上分别培养２２～２５ｈ、１３～１７ｈ和１８～２４ｈ；然后是制作细菌涂片时，取菌量要少于１／３环，涂菌稀薄、均匀；最后是染色。染色的第一步是用草酸铵结晶紫初染６０ｓ，再用碘液媒染６０ｓ，最后乙醇脱色时间是关键，应严格控制在３０～４５ｓ为宜。只有控制好影响革兰氏染色结果的各个环节，才能得到正确的染色结果。关键词：革兰氏染色；影响因素；形态观察中图分类号：Ｑ－３３文献标志码：Ｂ文章编号：１００２－４９５６（２０１１）０５－００４１－０３Ａｎ

3、ａｌｙｓｉｎｇｒｅａｓｏｎｓｏｆｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｏｆＧｒａｍｓｔａｉｎｉｎｇ１，ＣｈｉＪｉｅ１，ＱｉＹｕｎ１，ＳｕｎＨａｏ２ＨｏｎｇＱｉｎｇｈｕａ（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＴｉａｎｊｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ３０００７２，Ｃｈｉｎａ；２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｕｍａｎＲｅｓｏｕｒｃｅｓ，ＴｉａｎｊｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ３０００７２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｉｍｐ

4、ｒｏｖｅｔｈｅｔｅａｃｈｉｎｇｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓｏｆＧｒａｍｓｔａｉｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，Ｇｒａｍｓｔａｉｎｍｅｔｈｏｄｉｓｕｓｅｄｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｔｈｅｓｐａｗｎａｇｅｏｆｔｈｅｓｒａｉｎ，ｔｈｉｃｋｎｅｓｓｏｆｔｈｅｍｉｃｒｏｂｅｓｍｅａｒ，ｍｏｒｄａｎｔｄｙｅｉｎｇｔｉｍｅｏｆｔｈｅＩｏｄｉｎｅｓｏｌｕｔｉｏｎ，ａｎｄＥｔｈａｎｏｌｍａｒｋｉｎｇｔｉｍｅｔｏｔｈｅｓｔａｉｎｒｅｓｕｌｔｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈａｔｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｔ

5、ｏｇｅｔｔｈｅｒｉｇｈｔｒｅｓｕｌｔｓａｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｓ：Ｆｉｒｓｔｌｙ，ｃｕｌｔｕｒｉｎｇＥ．ｃｏｌｉ，ＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓａｎｄＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓｉｎｔｈｅａｇａｒｍｅｄｉｕｍｓｌａｎｔ２２—２５ｈ，１３—１７ｈａｎｄ１８—２４ｈ．Ｔｈｅｎ，ｔｈｅｔａｋｉｎｇａｍｏｕｎｔｏｆｂａｃｔｅｒｉａｉｓｌｅｓｓｔｈａｎ１／３ｒｉｎｇｓｗｈｅｎｍａｋｉｎｇｓｍｅａｒｓ，ｂａｃｔｅｒｉａｂｅｉｎｇｃｏａｔｅｄｔｈｉｎａｎｄｕｎｉｆｏｒｍ．Ｌａｓｔｌｙ，ｉｔｉｓｓｔａｉｎｉｎ

6、ｇ．Ａｎｄｔｈｅｆｉｒｓｔｓｔｅｐｏｆｓｔａｉｎｉｎｇｉｓｔｏｕｓｅａｍｍｏｎｉｕｍｏｘａｌａｔｅｃｒｙｓｔａｌｖｉｏｌｅｔｓｔａｉｎｉｎｇａｂｏｕｔ６０ｓ，ｔｈｅｎｉｏｄｉｎｅｍｏｒｄａｎｔ６０ｓ；ｔｈｅｔｈｉｒｄｋｅｙｓｔｅｐｉｓｅｔｈａｎｏｌｂｌｅａｃｈｉｎｇｔｉｍｅｂｅｓｔｒｉｃｔｌｙｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｉｎ３０—４５ｓ．Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｇｅｔｔｈｅｃｏｒｒｅｃｔｓｔａｉｎｉｎｇ，ａｌｌｓｔｅｐｓｏｆＧｒａｍｓｔａｉｎｉｎｇｓｈｏｕｌｄｂｅｓｔｒｉｃｔｌｙｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：

7、Ｇｒａｍｓｔａｉｎｉｎｇ；ｅｆｆｅｃｔｆａｃｔｏｒ；ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ在微生物学实验教学中，革兰氏染色法是每个学１材料与方法生必须掌握的实验操作技能。在实验中如果控制不好菌种的菌龄、细菌涂片的取菌量、碘液媒染时间和乙醇１．１染色液及试剂［１］脱色时间，常常会出现假阳性或假阴性的实验结果，草酸铵结晶紫染色液：将２．０ｇ结晶紫溶解在２０染色成功率低，因而极大地挫伤了学生的实验兴趣和ｍＬ、质量分数为９５％的乙醇中制成Ａ溶液；将０．８ｇ积极性。为此，探讨影响革兰氏染色结果的各种因素草

8、酸铵溶解在８０ｍＬ蒸馏水中制成Ｂ溶液；再将Ａ溶［２］并对其原因进行分析，提高染色结果的准确性，显得尤液与Ｂ溶液混合，静置４８ｈ后使用。为重要。碘液：先将１．０ｇ碘化钾溶解于少量蒸馏水中，再将０．５ｇ碘溶解在碘化钾溶液中，使碘完全溶解后加蒸馏水至１５０ｍＬ并混匀。番红染色液：将０．５ｇ番红溶解于２０ｍＬ的９５％收稿日期：２０１０－０９－０７基金项目：国家科技重大专项项目（２００８ＺＸ０７３１４－００４）；天津大学教学乙醇中，然后