资源描述：
《革兰氏染色结果的影响因素及原因分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、ISSN1672-4305实验室科学第1期2009年2月CN12-1352/NLABORATORYSCIENCENo.1Feb.2009革兰氏染色结果的影响因素及原因分析王芳,宋瑛琳,田明(山东农业大学生命科学学院,山东泰安271018)摘要:研究了菌龄、涂片厚度、媒染时间、乙醇脱色程度等对革兰氏染色结果的影响。结果表明,在进行革兰氏染色时,大肠杆菌在营养琼脂培养基上的培养时间不宜超过25小时,涂片时应为均匀薄片,媒染时间以30～60s为宜。乙醇脱色程度是革兰氏染色的关键,脱色时间应严格控制在20～30s。而枯草芽孢杆菌的培养时间不宜超过16小时,媒染时间以30～90s为宜,脱色时间应严格控制
2、在30s以内。关键词:革兰氏染色;菌龄;脱色时间;影响因素中图分类号:Q93-333文献标识码:A文章编号:1672-4305(2009)01-0104-03RelatedfactorsandreasonanalysisonresultofGram'sdyeWANGFang,SONGYing-lin,TIANMing(CollegeofLifeScience,ShandongAgriculturalUniversity,Taian271018,China)Abstract:Theinfluencesofbacteriumage,theeventhicknessofsmear,mordantag
3、enttime,thede2greeofethanoldecolourationandotherrelatedfactorsontheresultofGram'sdyeofbacteriumarestud2ied.TheresultshowsthatE.coliinthenutrientagarculturetimeshouldnotmorethan25hoursinGram'sdyeing.Smearshouldbeevenandthin.Themordantdyeingtimetakes30～60sassuitable.Thedegreeofethanoldecolourationiske
4、ytoexperimentandthetimeofdecolourationisstrictlycon2trolledbetween20～30s.WhilethecultivationtimeofBacillusshouldnotmorethan16hours,themordantdyeingtimetakes60～90sassuitable.Thedecolorizationtimeshouldbestrictlycontrolledin30s.Keywords:Gram'sdye;bacteriumage;decolourationtime;influencefactors革兰氏染色法是细
5、菌学中一个重要的鉴别染色期。此时菌体的细胞壁成分和结构最为典型,经革法,学生通过这个实验,可初步对细菌学有一个总兰氏染色液处理后,能正确地反映染色的结果。若体上的认识,提高其学习微生物学的兴趣。但是革菌体细胞未成熟或已经老化,染色结果可能会出现兰氏染色的结果,受许多因素的影响,但其中最重完全相反的情况。大肠杆菌的活跃生长期为24h要和关键的是菌龄和乙醇脱色时间对染色结果的影左右,枯草芽孢杆菌活跃生长期为在14～16h,故响。因为操作不当会带来完全相反的结果。因此,选择从18～32h的范围,分10个时间段进行涂片了解影响革兰氏染色结果的各种因素,提高染色结染色,实验结果见表1。果的准确性,就显得
6、特别重要。由表1可以看出,培养时间在23～25h的大肠杆菌和培养时间在14～16h的枯草芽孢杆菌均能1菌龄对染色结果的影响得到正确的染色结果,但培养时间超过25h后,有革兰氏染色要求菌种被染色时处于活跃生长王芳,等:革兰氏染色结果的影响因素及原因分析105一半以上枯草芽孢杆菌出现阴性反应。出现阴性反由表2结果显示,涂片浓厚时,菌体明显堆积应的枯草芽孢杆菌发现其有很多菌体已不呈典型杆在一起,因大肠杆菌密集不易脱色或脱色不完全而+状,显然由于培养时间过长,菌体已经死亡或部分呈G反应;而枯草芽孢杆菌涂片浓厚时,以至残自行溶解,造成细胞壁通透性增大而呈假阴性。留大量结晶紫,经番红复染后观察不到典型的蓝
7、紫色而常常呈现紫色。因而无论大肠杆菌还是枯草芽2涂片质量对细菌的堆积密度染色结果的孢杆菌涂片时均匀分散才能得到正确的结果。影响3媒染时间对染色结果的影响用直径3mm的接种环分别挑起培养24h的大肠杆菌和培养15h的枯草芽孢杆菌满环、半环、甚将培养24h的大肠杆菌和培养15h左右的枯草至更少量涂片,使细菌在一滴纯净水中涂成直径为芽孢杆菌染色,用碘液作媒染剂,覆盖时间分别为12～15mm的片状,作革兰
