HSCCC分离体系的筛选与影响因子

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1、高速逆流色谱仪的应用——体系的筛选及其影响因素TOPICS:HSCCC概念体系筛选的主要参数K值的测定方法分离的影响因素体系的选择方法具体实例小结高速逆流色谱（HSCCC）是利用螺旋柱在行星运动时产生的离心力，使互不相溶的两项不断混合，同时保留其中的一相（固定相），利用恒流泵连续输入另一相（流动相），随流动相进入螺旋柱的溶质在两相之间反复分配，按分配系数的次序，被依次洗脱。在流动相中分配比例大的先被洗脱，在固定相中分配比例大的后被洗脱。与传统色谱相比，它是液液分配的，动态的，多维力场的分离方法。HSCCC主要参数影响HSCCC体系的分离效果的主要参数

2、K待分离样品的不同成分在上下相中的溶解度的分配比K＝Cs/Cm理想的分配比值k=0.67~1.5CsCm两种溶质分离因子：α＝K1/K2测定方法如何测定K值？▲利用分光光度计▲利用TLC▲利用HPLC▲利用生物活性分配比率法◆固定相保留率◆转速及流速◆温度◆pH值◆进样量当体系选定后，在适当合理的调节这些因素，样品可以达到有效的分离。分离的影响因素◆固定相保留率直接决定分离柱的有效长度，合适的范围为30％～80％。在一定范围内，保留率越高，分离越好。◆转速及流速不同的机型可选择不同的转速及流速。在一定范围内，转速提高，保留增加；流速降低，保留增加。◆

3、温度不同的样品及不同的体系，温度的影响可能都会不一样。可配置恒温装置，控制实验因素。◆pH值可通过调节体系的PH值使样品的溶解度达到合适的范围。◆进样量进样量的大小及溶样体积多少的影响选择方法一、经典体系二、参考文献三、自选体系四、体系的调节五、常见体系组合一、经典体系正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水（1－1－1－1）正己烷－甲醇－水（1－1－1）氯仿－甲醇－水（4－3－2）文献：银杏黄酮类有效成分的分离溶剂系统:氯仿-甲醇-水(4:3:2)流速:2ml/min转速:900rpm分离温度:26CACB二、参考文献参考与目标成分相类似的成分的分离，确定初分

4、体系的组分及比例。文献：葛根素(黄酮苷)乙酸乙酯－正丁醇－水（2－1－3）小檗碱(生物碱)氯仿－甲醇－0.1mol/LHCl（2－1－1）紫杉醇(萜类)正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水（1－1－1－1）三、自选体系在选择之前，清楚了解目标成分的性质。目标成分的性质对体系的选择很重要，如它的溶解度、极性、分子结构等。蒽醌类易溶于氯仿、乙酸乙酯、乙醇、甲醇苷类易溶于正丁醇、乙醇、甲醇、水在研究的任一阶段都可进行自选体系的摸索。重点是：体系组成和各组分比例。根据样品在各种溶剂中的溶解性来确定组分，然后通过测K值观察样品在上下相中的溶解度变化来确定比例。例如：挥发

5、油类性质：易溶于石油醚、正己烷，溶于甲醇、乙醇，不溶于水组分可选择：石油醚－甲醇－水石油醚－乙酸乙酯－甲醇－水组分比例可通过测K值，确定比例是1－1－1或4－3－1，从而初步筛选出体系四、体系的调节1、两个方向（一）增加（或减少）目标成分在固定相中的溶解度（二）减少（或增加）目标成分在流动相中的溶解度2、具体调整方法（一）微调体系比例如：氯仿－甲醇－水（4－3－2）微调比例：3.5－3－2或4－3－1.5（二）增加（或减少）某一组分如：四氯化碳－氯仿－甲醇－水（1－4－3－2）（三）替换某一组分如：四氯化碳－甲醇醇－水（4－3－2）五、常见体系组合小

6、极性正己烷－甲醇石油醚－甲醇－水正庚烷－乙腈－二氯甲烷正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水中等极性氯仿－甲醇－水正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水大极性乙酸乙酯－丁醇－水氯仿－甲醇－丁醇－水具体实例实例1分离金银花中的绿原酸结构式：分析：有机酸，溶于乙酸乙酯、丁醇，易溶于甲醇、乙醇、水组分可选择：氯仿－甲醇－水；正丁醇－乙酸乙酯－水初步判断：大极性现选定它们的比例分别为5－6－4；4－1－5，测定以上体系的K值，分别为15，0.075。分析K值较小，考虑到样品为有机酸，以正丁醇－乙酸乙酯－水为基准调节，将乙酸乙酯替换为乙酸，经测定K值为2.09。上机，如图实例2分离

7、大黄蒽醌类结构式：分析：易溶于乙醚、乙酸乙酯、氯仿，溶于甲醇、乙醇，不溶于水组分可选择：氯仿－甲醇－水；正己烷－甲醇－水；正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水初步判断：中等极性偏小现选定正己烷－甲醇－水体系，比例根据测定K值（1－1－1，2－1－1，1－1－2）情况，选定2－1－1上机实验，结果如图：100120140160120140160180200Absorbance(mV)Time(min)结果分析，流动相溶解度太大，固定相几乎无溶解，增加一相，让其在固定相中溶解增加，所以加入少量乙酸乙酯，比例调整为：10－1－5－5上机实验，结果如图：0100150

8、200260120140160180200IIIIIIAbsorbance(mV)Time(min)结果分析