分子肿瘤学基础

《分子肿瘤学基础》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、毒理学教研室徐德祥分子肿瘤学基础第一章绪论肿瘤发病的流行病学现状肿瘤发病机制的研究进展肿瘤的分子诊断研究进展一、肿瘤发病的流行病学现状1、恶性肿瘤发病和死亡率明显升高，成为人类死因的第一位（城市）或第二位（全国）；2、恶性肿瘤的发病顺位发生了明显的变化。生活方式改变环境改变二、肿瘤发病机制的研究进展1、肿瘤的多因素多阶段多基因参与的过程2、肿瘤的发病与体细胞突变有关3、信号传导与肿瘤4、细胞周期与肿瘤5、细胞分化与肿瘤6、细胞凋亡与肿瘤7、肿瘤的遗传易感性肿瘤的多因素多阶段多基因参与的过程多因素多阶段：二阶段学说多阶段学说多基因参与：癌基因、抑癌基因细胞凋亡相

2、关基因、肿瘤易感基因肿瘤的发病与体细胞突变有关癌基因：维持细胞正常生理功能所必须的基因细胞增殖、分化、信号转到体细胞突变学说：肿瘤的发生与癌基因突变有关点突变、DNA扩增染色体重排、甲基化抑癌基因：纯合缺失或失活而引起恶性转化的基因二次突变学说（Rb基因，视网膜母细胞瘤）遗传性视网膜母细胞瘤患者（Rb等位基因突变或缺失）：一次突变引起发病非遗传性视网膜母细胞瘤：二次突变突变引起发病肿瘤易感性和易感基因肿瘤易感性：环境与遗传肿瘤易感基因：癌基因和抑癌基因的突变DNA修复缺陷代谢酶基因：化学致癌三、肿瘤的分子诊断及其研究进展1、分子诊断在肿瘤研究中的意义和应用肿瘤

3、的分子诊断涉及到各种恶性肿瘤及癌前病变，主要集中在各种癌基因、抑癌基因及相关基因的检测，分别在蛋白质、RNA、DNA水平进行判断，为肿瘤的基础研究、肿瘤防治和个体化或预见性治疗提供更详尽的证据。（1）肿瘤易感基因的检测（2）肿瘤的分类对Bcr区基因重排检测：可诊断慢粒并与急粒鉴别。神经母细胞瘤——N-Myc明显扩增和过表达；神经上皮瘤——c-Myc扩增和过表达。（3）肿瘤的早期诊断（4）肿瘤的预后判断：从分子水平上判断肿瘤的良、恶性及预后，有较高的准确性。肿瘤相关基因的突变、扩增及过表达等常与预后密切相关。（5）肿瘤的个体化和预见性治疗:肿瘤的发生是多基因、多

4、步骤、多阶段的过程，在发生、发展的不同时期，可能涉及不同的基因和不同的变化形式，而基因的变化和基因间的信号传递与肿瘤临床治疗的敏感性密切相关。提供肿瘤基因变化，对治疗有指导意义。（6）肿瘤的预后监测2、肿瘤基因过表达及其检测（1）基因过表达的形式癌基因激活和抑癌基因失活，是肿瘤发生过程中的关键因素。癌基因产物过表达是癌基因激活的重要表现形式之一。癌基因一般为单拷贝基因，在肿瘤细胞内的一些癌基因在DNA复制过程中扩增，常导致基因产物过表达，表现为mRNA和蛋白质量增加。有些抑癌基因突变后可起到癌基因的作用（如p53基因），产生突变型蛋白。（2）基因过表达的检测①

5、表达产物的检测：几乎所有被克隆的癌基因、抑癌基因都有相应抗体，其中大多数已商品化。免疫组化（immunohistochemistry）酶联免疫吸附实验（ELISA）免疫沉淀法：检测并定量分析蛋白质混合物中的靶抗原敏感（可检出100pg的放射性标记蛋白）。与SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳并用，可用于分析外源基因在原核和真核宿主细胞中的表达。蛋白印迹法（Westernblot）：70年代末80年代初，在蛋白质凝胶电泳（分辨率高）和固相免疫测定（特异敏感）的基础上发展的，结合了二者优点，无需同位素标记，具有从混杂抗原中检出特定抗原，或从多克隆抗体中检出单克隆抗体的优势，

6、还可对转移到固相膜上的蛋白进行连续分析，有蛋白质反应均一性、固相膜保存时间长等优点。敏感性为1～5ng。细胞裂解—→SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳→蛋白质电转移→封闭→加一抗→加二抗→显色照像。流式细胞仪（flowcytometry）测试法：用荧光标记抗体与含有特异抗原的细胞结合，用流式细胞仪对含不同荧光信号的细胞分类测试，可检测细胞表面受体、标志物或特异性蛋白及细胞的分类分析。②基因扩增的检测：肿瘤基因扩增可产生过量的表达蛋白，也可表现为基因拷贝数增加和转录产物mRNA增加。经典检测方法为核酸分子杂交，包括原位杂交（insituhydridization，ISH

7、）、荧光原位杂交（FISH）、DNA杂交（Southernblot）、RNA杂交（Northernblot）、原位PCR、逆转录PCR（reversetranscriptionPCR，RT-PCR）。FISH将荧光素标记克隆的DNA片段与染色体或细胞间期染色质杂交，以测定特定的DNA片段是否有缺失或扩增。原位PCR：结合了PCR与ISH技术优点，在组织切片或细胞涂片上原位对特定DNA或RNA进行扩增，再用特异性探针作原位杂交检测，以达到对靶核苷酸进行定性、定位、定量分析。逆转录PCR（RT-PCR）用来扩增从RNA分子中得到的一段特异序列。RNA首先被逆转录为

8、cDNA。用位于一段特异序列或一个基因