第2节 基本原理与主要分离类型

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1、第八章高效液相色谱分析法一、液-固吸附色谱liquid-solidadsorptionchromatograph二、液-液分配色谱liquid-liquidpartitionchromatograph三、离子交换色谱ion-exchangechromatograph四、离子色谱ionchromatograph五、离子对色谱ion-pairchromatograph六、排阻色谱size-exclusionchromatograph七、亲和色谱(AC)Affinitychromatograph第二节主

2、要分离类型与原理highperformanceliquidchromatographbasicprincipleandmainseparatingtypes2021/10/4一、液-固吸附色谱liquid-solidadsorptionchromatography固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂；流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性；

3、缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；2021/10/4液-固色谱的基本原理：组分分子与溶剂分子在固定相表面的竞争吸附Xm+nSa==Xa+nSm流动相吸附相吸附相流动相按吸附能力的大小，吸附能力大小的组分先出峰应用92页2021/10/4环境中有机氯农药残留量分析固定相：薄壳型硅胶(37～50m)流动相：正己烷流速：1.5mL/min色谱柱：50cm2.5mm(内径)检测器：差示折光检测器可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。2021/10/4二、液-液分配色谱固定相与流动相均为液体（互不相溶）；

4、基本原理：组分在固定相和流动相上的分配；流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相normalphase），反之，流动相的极性大于固定液的极性**（反相reversephase）。正相与反相的出峰顺序相反；固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。2021/10/4液相色谱固定相1.液-液分配及离子对分离固定相（1）全多孔型担体由氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的

5、多孔球体；早期采用100μm的大颗粒，表面涂渍固定液，性能不佳已不多见；现采用10μm以下的小颗粒，化学键合制备柱填料；（2）表面多孔型担体（薄壳型微珠担体）30～40μm的玻璃微球，表面附着一层厚度为1～2μm的多孔硅胶。表面积小，柱容量底；2021/10/4（3）化学键合固定相化学键合固定相:目前应用最广、性能最佳的固定相；a.硅氧碳键型：≡Si—O—Cb.硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si—C稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广；c.硅碳键型：≡Si—Cd.硅氮键型：≡Si—N2021/10/4化

6、学键合固定相的特点（1）传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快；（2）寿命长，化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击；耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定；（4）选择性好，可键合不同官能团，提高选择性；（5）有利于梯度洗脱；存在着双重分离机制：(键合基团的覆盖率决定分离机理)高覆盖率：分配为主；低覆盖率：吸附为主；应用例子2021/10/4稠环芳烃的分析稠环芳烃多为致癌物质。固定相：十八烷基硅烷化键合相流动相：20%甲醇-水～100%甲醇线性梯度淋洗，2%/min流速：1mL/min柱温：50ºC柱压：7

7、0104Pa检测器：紫外检测器2021/10/4三、离子交换色谱ion-exchangechromatography固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液；基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长；阳离子交换：R—SO3H/Na+M+=R—SO3M+H+/Na阴离子交换：R—NR4OH/Cl+X-=R—N

8、R4X+OH-/Cl应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。2021/10/4平衡常数对于阳离子:K=[R—SO3M][H]/[R—SO3H][M]K值越大,保留时间越长.Fe3+＞Ba2+＞Pb2+＞Ca2+＞Ni2+＞Cd2+＞Cu2+＞Co2+….Na+＞H+＞Li+对于阴离子:K=[R—NR4X][OH-]/[R—NR4OH][X-]柠檬酸根＞SO42-＞C2O42-＞I-＞HSO4-＞NO3-＞….SCN-＞Cl-＞OH-＞F-2021/1