长春花组织培养

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1、长春花——组织培养长春花的价值长春花的组培进展我们的实验情况长春花的花语：——快乐，回忆，青春常在，坚贞长春花组培的前景展望植物名称：长春花学名：Catharanthusroseus(L.)Don科目：夹竹桃春花属别名：日日春、日日新、日春花、四时春、五瓣梅、雁来红原产地：马达加斯加、印度，现有许多园艺栽培种。多年生草本植物观赏价值：长春花姿态优美，花期特长，适合布置花坛、花境。可用于城市园林地被，也可用于室内盆栽观赏药用价值：迄今已经从中提取分离出100多种例如长春碱、长春新碱、文多灵、长春质碱、

2、阿玛碱、蛇根碱等生物碱。其中,长春花碱、长春花新碱具显著的抗癌作用,阿玛碱可防治冠心病,蛇根碱为镇痛药。又含有肌醇、琥珀酸、黄酮等其它化合物。因此，药理方面具有抗肿瘤、降压、降血糖、利尿以及止血、抗菌等作用，具有很高的药用价值。目前主要从天然植物中提取长春碱和长春新碱，但是它们在植物体中的含量极其微小，仅为百分之几至十万分之几，化学合成和半合成也不太理想。因此通过长春花的组织培养、细胞培养等的一系列工作来获取有效成分，才能更好地进行长春花的研究与开发，从而挖掘更大的市场潜力。研究进展基本培养基与外植

3、体的选择以前的实验中有人先后在B5、White、Wo-L、WoNiKO5-L培养基上均诱导出长春花愈伤组织，且在其上的继代培养也获成功。现在常用MS培养基郑宗坤等（2001）在MS+10％椰子汁培养基上，以长春花的叶柄为外植体诱导率最高，嫩叶次之，而嫩茎和嫩根最差，不能作为诱导培养的最佳外植体——长春花组织培养条件的最优化细胞生长及细胞培养物中药用成分含量的影响因素长春花作为特殊的药用植物，其组织培养具有特殊的目的，其中诱导产物的药用成分含量是我们所关注的主要问题之一。长春花组织培养及细胞生长和生物

4、碱的合成受内部机制与外部环境共同调控，培养基组成、光、温度、pH值、外源激素、前体物质、诱导子、培养方式等都有影响。植物生长调节物质在培养基的各组分中，对细胞生长和产碱最有影响的因素之一是植物激素。在长春花组织培养中，常用激素有2,4-D，激动素(KT)，萘乙酸(NAA)，苄基腺嘌呤(6-BA)。郭胜娟（2004）在长春花的细胞培养与组织快繁的实验中得出不同种类、不同浓度的植物生长调节物质具有不同的诱导和生长效应：单独使用NAA浓度为2.0mg/L时诱导率最高，生长势亦较好，而单独使用2,4-D或6

5、-BA效果都不理想，单独使用KT时，各浓度下均无愈伤组织产生。在使用组合激素NAA0.5mg/L+2,4-D0.5mg/L+6-BA2.0mg/L时诱导率及生长势均最佳，此时的愈伤组织是用作细胞培养的最佳材料。孙敏等（2002）用多因子正交实验筛选出MS+2,4-D0.8mg/L+NAA1mg/L+ZT0.2mg/L固体培养基诱导愈伤组织出愈率快、诱导出的愈伤组织生长旺盛、颜色为浅黄色或白色、形状疏松呈细颗粒状，是筛选出的最佳愈伤组织的诱导培养基。张向飞等（2004）在长春花的继代培养的悬浮液中加入

6、不同浓度的外源ABA、乙烯利和ASA，培养24h测得吲哚总碱及其中阿玛碱和长春质碱含量均有明显提高。赵剑等（1999）在诱导长春花愈伤组织的过程中使用不同种类和水平的激素对生物碱的合成影响较大，发现2,4-D显著抑制生物碱合成。金屹等（1997）实验表明在生长阶段采用加2,4-D的培养基，细胞生长最快，在产碱时采用加入NAA的培养基，以利于次级代谢物的生产。郑宗坤等（2001）实验发现采用2,4-D：KT=2～3．5ppm：1ppm的激素配方，不仅诱导率最高，诱导时间短，而且诱导出来的组织细胞群生长

7、良好、快速，组织结构呈乳白色，疏松呈颗粒状，适合后面的继代培养和大量繁殖，用于诱导长春花叶柄的愈伤组织细胞较为理想光照时间和光质都会影响细胞生长和生物碱类的积累。郑宗坤的实验中暗培养10d后，采用12h/d光照条件培养，效果理想。光照对愈伤组织培养的影响：（参考相关文献所得）(1)在后指数期光强对细胞生长有些影响，而对生物碱含量无明显影响（陈敏等.2001）；(2)以白光为基准，蓝光对细胞生长和生物碱积累均有促进作用，红光、黄光影响程度在白光之下，绿光有抑制作用（元英进等.光强和单色光对长春花愈伤组

8、织培养的影响,1993);(3)一般认为光对阿玛碱/蛇根碱比值具有调节作用。郑珍贵等（1999）认为光照显著减少了阿玛碱生成量，但光照时间对阿玛碱含量和释放量影响不大，每天光照12h比24h生成的蛇根碱多（郑珍贵等，1996），而阿玛碱正相反。光照条件随着组培技术的不断发展和完善,植物组织培养技术与化学诱变剂诱变相结合的离体诱变越来越显的相得益彰。近年来也受到国内外许多学者的高度重视。相关实验结果表明,虽然植物组织培养也会产生无性变异,但离体诱变能使一些有益的性状突变