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1、第16卷第6期:7生 物 技 术Vol116,No16:72006年12月BIOTECHNOLOGYDec12006huZP3b177-348肽段在大肠杆菌中的表达及其纯化[J].生殖与避孕,204.2004,24(3):143-148.[10]叶志华,梁建庆.人ZP3基因的RT-PCRcDNA克隆[J].生物技[7]宋力雯,汪玉宝,倪崖,等.人卵透明带蛋白ZP3a和ZP3b肽段的免术,2005,15(4):1-4.疫原性及其抗血清体外抑制人精子-半透明带结合[J].生理学报,[11]SambrookJ,FritschEF,Maniatis
2、T.MolecularCloning:aLaboratory2005,57(6):682-688.Manual[M].2nded.NewYork:ColdSpringHarborLabortoryPress,1989.[8]唐键,谢琪璇,潘善培,等.重组人卵透明带ZP3蛋白在毕赤酵母中[12]ChapmanNR,KessopoulouE,AndrewsPD,etal.Thepolypetideback2的表达[J].生物工程学报,2003,19(6):758-762.boneofrecombinanthumanzonapellucidagl
3、ycoprotein-3initiatesacrosomal[9]熊波,曹佐武,何柳媚,等.人卵透明带3基因片段hZP3.3的克隆及exocytosisinhumanspermatozoainvitro[J].Biochem.J,1998,330(3):839其在毕赤酵母中的表达[J].南昌大学学报:理科版,2005,29(2):200--845.用昆虫细胞表达系统表达人组织激肽释放酶原1,3231133杨青,刘建茹,张晓丹,张志强,冯立,张丽华,张玉奎(1.沈阳军区联勤部疾病预防控制中心,辽宁沈阳110034;2.沈阳军区联勤部大连第二干
4、休所,辽宁大连116017;3.中科院大连化学物理研究所,生物技术中心,辽宁大连116031)摘要:目的:利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统表达proHUK,系统优化表达条件。方法:用改进的方法对昆虫细胞进行了无血清悬浮适应培养,用ELISA、SDS-PAGE方法对各种条件下proHUK的表达量进行检测。结果:Sf-9、Hi-5细胞在血清减量速66度为5%、1%,接种密度分别为2×10cellsPmL、1×10cellsPmL时能很快适应无血清悬浮培养。在病毒感染复度MOI为10,细胞接6种密度为1×10cellsPmL条件下培养96h后,pr
5、oHUK的表达量最高可达30mgPL。结论:改进的方法使昆虫细胞能更快适应无血清悬浮生长条件,获得了高表达proHUK的方法,为其大规模制备奠定了基础。关键词:组织激肽释放酶原;昆虫细胞;表达中图分类号:Q786 文献标识码:A 文章编号:1004-311X(2006)06-0007-03ExpressionofHumanTissueProkallikreininInsectCells1,3231133YANGQing,LIUJian-ru,ZHANGXiao-dan,ZHANGZhi-qiang,FENGLi,ZHANGLi-hua,
6、ZHANGYu-kui(1.CenterforDiseaseControlandPreventionofShenyangCommand,Shenyang110034,China;2.DalianSecondRest-homeofShenyangCommand,Dalian116071,China;3.CenterofBiotechnology,DalianInstituteofChemicalPhysics,ChineseAcademyofSciences,Dalian116011,China)Abstract:Objective:Usin
7、gbaculovirus-insectcellsystemtoexpresshumantissueprokallikrein.Toobtaintheoptimalexpressionconditionsfortherecombinantprokallikrein.Methods:Anewmethodwasdevelopedtorecultureinsectcells.TheexpressionlevelwasdetectedbyELISAandSDS-PAGE.Results:Thecellswerereculturedinmediumwi
8、thoutFBS,andfurthersuspendedinaspinnerflask.Theexpressionlevelof6recombinantprokallikrein
