乳酸环丙沙星对鲤鱼肠道菌群的影响

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1、乳酸环丙沙星对鲤鱼肠道菌群的影响11＊2211杨雨辉佟恒敏卢彤岩赵吉伟李晓霞王君（1．东北农业大学1500302．中国水产科学研究院黑龙江水产研究所150076）本文采用常规细菌的鉴定方法，研究了乳酸环丙沙星对鲤鱼肠道菌群的影响，结果表明鲤鱼经口灌服乳酸环丙沙星前后，细菌的数量和组成比例都发生了明显的改变。鲤鱼在应用68乳酸环丙沙星前，肠道前、中、后肠段的细菌数量为10-10CFU/g，经口灌服乳酸环丙沙星后肠道细菌的数量减少，并且组成比例也发生了改变，用药后120h细菌的组成比例尚未完全恢复到用药前的水平，肠

2、道内细菌的变化情况主要为，肠道前、中、后肠段的气单胞菌属的比例都明显下降，其它的细菌比例明显升高，而且出现有些种属的细菌在用药后不能检出的现象。这些结果表明乳酸环丙沙星应用于水产养殖后，容易导致水产动物肠道菌群的失衡，且恢复到用药前的水平较慢。关键词：乳酸环丙沙星肠道菌群鲤鱼[1]研究表明，在正常情况下鱼类肠道内存在着大量的细菌群落，这些细菌群落是动物长[2][3,4]期进化的结果，它们和动物的免疫功能、营养需求都有着及其密切的关系。在水产养殖中，由于鱼病的发生而造成许多重大的经济损失，为了减少这种损失，各种抗

3、菌药物被大量的使用，但是如果这些药物不被科学合理的应用，往往就会造成被应用动物的肠道菌群失衡，而引起新的疾病。由于抗菌药物的不合理应用造成肠道疾病的病例在人医和兽医上已有[5,6]不少文献的报道。乳酸环丙沙星是第三代喹诺酮类药物，目前已被广泛应用于人医和兽医临床，并且也被应用于水产养殖作为治疗鱼类细菌性感染的药物，但是有关该药对鱼类肠道菌群的影响在国内外还未见报道。本研究以鲤鱼为模型动物，检验了鲤鱼经口灌服乳酸环丙沙星后肠道内好氧及兼性厌氧菌群的种群和数量的变化，旨在为评价该种药物应用于水产动物后对肠道菌群的影

4、响，同时为评价该药应用于水产养殖是否科学提供理论参考。1材料与方法1.1乳酸环丙沙星原粉含量98.5%，批号010914，浙江新昌县康乐兽药有限公司生产。1.2实验鱼及饲养管理本实验所用的鲤鱼鱼种由黑龙江水产研究所良种试验场提供，选择体质健壮，体重150±20g的鲤鱼，在室内暂养一周，每天按鱼体重的2%投喂饲料，水温保持在18-22℃，试验期间不投喂饲料。1.3药物投喂及试样的采集将乳酸环丙沙星用双重纯化水溶解成7.5mg/ml的水溶液，用塑料软管强制灌入鲤鱼的食道，剂量为10mg/kg.b.w，然后分别在灌服

5、乳酸环丙沙星药液后4、8、12、24、48、72、96和120h后取样。鲤鱼体表用75%的酒精棉球消毒，打开腹腔，用棉线分别结扎食道、肛门和各段肠的交界处，再用剪刀分离各肠段，无菌水冲洗数遍后，剪碎，称取大约0.2g组织，加入50倍的灭菌生理盐水，匀浆，制成原液，每个时间点采取5尾鱼。4试剂及培养基的制作1.4.1分离培养基的制作＊通讯作者采用吉水等（1976）介绍的淡水鱼类琼脂培养基（FWA），略做修改，准确称取硫酸镁0.05g、牛肉粉2.50g，磷酸氢二钾0.20g，葡萄糖1.00g，蛋白胨5.00g，氯化

6、钠5.00g，酵母粉2.50g，琼脂粉17g，加水1000ml，用氢氧化钠调整pH至7.2-7.4，121℃，高压灭菌20min后备用。1.4.2鉴别用试剂和培养基的制作革兰氏染液的配置、氧化酶试纸的制作、葡萄糖发酵产气培养基、运动性试验培养基、肌醇利用培养基、需钠试验用培养基的制作[7，8]。1.5细菌计数将各段肠原液做10倍系列稀释，在FWA培养基平板上涂布，于30℃下培养24-48h后计数，并换算成每克肠所含的细菌数量。1.6细菌的鉴定在每个时间点的5尾鱼中随机选择三尾鱼的肠道菌进行细菌鉴定，在各肠段细菌

7、的分离板中，选择菌落清晰、分散而且菌落数在30-300之间的平板，随机地挑取30个菌落，用FWA培养基进行纯培养后，置4℃冰箱中保存，供细菌鉴定之用。菌种的鉴定参照《一般[7][9]细菌常用鉴定方法》和周文豪的方法进行,对于个别本方法不能鉴定的细菌则不列入本研究的讨论范围。2结果2.1鲤鱼经口灌服乳酸环丙沙星前后肠道细菌数量的变化及恢复灌服乳酸环丙沙星前后，鲤鱼肠道细菌数量（用每克组织细菌数量的对数值lgCFU/g表示）的变化如表1所示。未灌服乳酸环丙沙星的对照组的前、中、后肠段的细菌数量的对数值分别为6.20

8、1±0.165、7.134±0.329和8.437±0.227。灌服乳酸环丙沙星后，前、中、后肠的细菌数量都呈减少的趋势，中肠、后肠的前24h各时间点的细菌数量和对照组的中、后肠细菌数量都存在着显著的差异（P<0.05），在用药后24-48h后细菌数量恢复到未用药前的水平，但前肠各时间点的细菌数量和对照组的细菌数量之间没有显著差异（P<0.05），即乳酸环丙沙星对鲤鱼的前肠细菌数量没有