牛海绵状脑病实验室诊断技术之建立与监测

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1、牛海綿狀腦病實驗室診斷技術之建立與監測張國慧抽印本索取作者行政院農業委員會家畜衛生試驗所、李淑慧、翁敏召、蘇杰夫、林士鉉行政院農業委員會家畜衛生試驗所摘要爲了防範牛海綿狀腦病入侵我國，亟需建立國內牛海綿狀腦病實驗室診斷技術，緣此，筆者等於2001年出國硏習本病之相關診斷技術，至今已建立本病實驗室標準診斷流程，包括實驗室生物安全、組織病理學診斷、免疫組織化學染色法、西方免疫墨點法及酵素連結免疫吸附分析法等，並將這些診斷技術應用於本病之持續性監測計畫中。自1998年至2001年共監測127頭牛腦，檢體來源包括屠宰場或化製

2、場、結核病陽性撲殺場、神經症狀病死牛隻及其他原因送檢之病例，檢體來自北、屮、南區及離島共10縣市，經檢驗結果皆爲陰性。關鍵字:牛海綿狀腦病'狂牛病'普里昂‘實驗室診斷技術緒言牛海綿狀腦病(bovinespongiformencephalopathy,BSE)»俗稱狂牛病(madcowdisease)，是一種引起牛致死性的傳染性神經退行性疾病。1985年4月在英國首次觀察到牛有特殊的臨床症狀，並於1986年診斷出病原［24］，其病原是一種變性蛋白質，而非傳統的細菌或病毒等傳染性病原，但卻有感染力，稱之爲變性普里昂蛋白質

3、(scrapieprionprotein,PrP)［18］。目前認爲MPS'會將神經細胞內正常的PIP。轉化成PrPSc，而以等比級數的速度累積在神經細胞內，而造成神經細胞死亡，終使腦組織變成海綿樣，所以是一種造成動物致死性神經變性的疾病，統稱爲傳播性海綿狀腦病(transmissiblespongiformencephalopathies,TSE)或普里昂疾病(priondiseases)，許多動物皆有類似的疾病*包括在人引起庫賈氏症(Creutzfeldt・JakobDisease,CJD)、Kuru症、Gers

4、tmann-Straussler-Scheinker症候群(GSS)及致死性家族性失眠症(blalfamilialinsomnia,FFI)等；在牛引起BSE；在羊引起搔癢症(scrapie):在貂引起傅染性貂腦病(transmissibleminkencephalopathy,TME)；在鹿與麋鹿引起慢性消耗病(chronicwastingdisease,CWD)；在貓、獅、豹引起貓科海綿狀腦病(felinespongiformencephalopathy,FSE)，在受感染宿主會形成腦組織的海綿狀變性與神經膠細胞

5、增生等病變［14］。普里昂疾病之致病機序各異，目前的研究顯示，BSE的爆發可能是牛飼料添加之肉骨粉中含有大量的羊搔癢症病原所致［3］。此外，近年的硏究顯示發現導致BSE的病原與人類的變異型庫賈氏症(variantCJD)有關［6,12］，所以將BSE的病原設定爲會傳染給人類。自從英國爆發BSE之後，至2001年止已有二十一個國家包括：奧地利、比利時、捷克、丹麥、芬蘭、法國、德國、希臘、愛爾蘭、義大利、日本、列支敦斯登、盧森堡'荷蘭、波蘭、葡萄牙、斯洛伐克、斯拉維尼亞、西班牙及瑞士等國也陸續有病例發生。尤其是2001年

6、日本有三個確診病例，表示本病已由歐洲地區擴散至亞洲地區，所幸國內迄今未有病例報告。本病的發生除了會對畜牧產業造成衝擊外，亦使人民對政府的食品安全管理產生疑懼與恐慌，因此爲了防範BSE入侵我國，確保國民健康及畜牧產業之永續發展，亟需建立國內BSE診斷技術及診斷實驗室，故筆者等於2001年7月28日至8月11日赴美國「國家普里昂疾病病理監測中心j(NationalPrionDiseasePathologySurveillanceCenter)[2]/2001年11月18日至23日接受世界動物衛生組織(WorldOrgan

7、isationforAnimalHealth)之邀請赴泰國參加「區域性牛海綿狀腦病診斷與監測硏習會」，硏習BSE相關診斷技術。目前已依世界動物衛生組織訂定之診斷標準，建立本病之實驗室生物安全、組織病理學診斷、免疫組織化學染色法、西方免疫墨點法及酵素連結免疫吸附分析法等實驗室標準診斷流程並持續進行本病之監控計畫[1,16]。本報告將已建立之牛海綿狀腦病實驗室診斷方法加以說明，並報告目前之監測結果。材料及方法BSE的診斷以組織病理學爲主，並至少應配合免疫組織化學染色法或西方免疫墨點法或酵素連結免疫吸附分析法等其中一種檢驗

8、方能進行確診，茲將已建立之實驗室診斷與監測方法及實驗室生物安全要求詳述如後：實驗室之生物安全1.處理prion疾病的實驗室至少應達到生物安全二級的標準(biosaftylevel2,P2)°2.嚴禁在實驗室內飲食或抽煙。3•實驗室人員處理檢體時應穿著防護衣物。4.實驗室內所使用的消耗物品以不回收爲原則，儘量使用拋棄式耗材。5.實驗器械或容器等以