羊水细胞培养在产前诊断中应用价值

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1、羊水细胞培养在产前诊断中应用价值【摘要】目的探讨羊水细胞培养在产前诊断中的应用价值。方法178例具有产前诊断指征的孕妇，采用羊水细胞培养G显带技术进行检查。结果有10例孕妇染色体异常核型，检出率为5.62%,其中有6例为数目异常，4例为结构异常。结论羊水细胞培养在产前诊断中的应用价值髙。【关键词】羊水细胞培养；产前诊断；染色体核型分析产前诊断方法中最为广泛且可靠的方式是羊水脱落细胞培养和分析染色体核型分析［1］。本文旨在研究羊水细胞培养在产前诊断中的应用价值，现报告如下。1资料与方法1.1一般资料选择2012年4月〜2013年4

2、月在本院产科就诊的具有产前诊断指征的178例孕妇，年龄20〜47岁，孕周16〜25周，有70例孕妇唐氏综合征筛查为阳性，23例孕妇有异常生育史，60例孕妇年龄&ge；35岁，14例妇女于早孕服药，6例孕妇神经管急性筛查为阳性，5例孕妇丈夫染色体异常。1.2方法1.2.1羊膜穿刺经B超定位后，在无菌条件下，用一次性羊水穿刺针行羊膜穿刺术。舍弃最开始的2ml羊水，再抽取20〜30ml的羊水放入2支无菌离心试管中。1.2.2羊水细胞培养以1000r/min的离心速度将2支无菌试管中的羊水进行离心处理达10min,舍弃上层清液，保留管内

3、沉淀细胞和0.5ml羊水，加入20%胎牛血清及含张氏成分的5mlF10培养基，用细管使之混匀，将其接种于T-25的无菌试管中，在371有5%二氧化碳培养环境中进行培育，5d后观察细胞生长情况，若发现纤维状或者梭状细胞生长是，则可更换5ml新鲜培养液进行传代培养［2］。1.2.3收获细胞并进行制片在对羊水细胞进行培养6〜7d后，在倒置的显微镜下对正在培养的羊水细胞进行观察，观察其生长情况，发现有不同大小的梭长形细胞正在进行克隆并生长，每个克隆过的细胞其生长状态良好并且已经形成细胞岛。对培养皿中的培养液进行定时的更换，每天对细胞进行

4、观察，在观察2〜3d后，发现每个形成的细胞岛已经逐渐长成为透亮细胞，这些细胞较大，细胞融合度达到70%〜80%,并且数目不等，形状多呈圆形或类圆形，这时即可对细胞进行收获。在对细胞进行收获的前1d,更换新鲜培养液，在培养液中加入秋水仙素，使其浓度达到0.1mg/ml,在4〜5h后，使用显微镜观察，发现培养液中出现大量的呈鱼眼状的细胞时，即可对细胞终止培养并进行收获。加入0.25%的2ml胰酶消化液，在37°C的环境下放置5min,使得瓶壁上细胞脱落，再以1500r的转速离心处理8min,弃上清液。加入1.5m1的0.4%枸缘酸钠

5、和0.4%的氯化钾混合液低渗7min,滴片，常规G显带。每张玻片有20〜30个细胞分裂相，进行染色体核型分析，每例分析核型5个。1.3核型统计分析使用显微镜对细胞核型进行观察，常规技术分散良好的细胞核型有30个中期分裂相，细胞核型计数发生异常的则有50个分裂相，如出现&ge；2个细胞核型计数异常，则对所有分裂相进行计数，使用染色体核型分析软件对核型图像进行采集，对3〜5个核型进行分析，并完成报告，为遗传咨询提供意见。2结果进行羊水穿刺培养一次性成功的患者有178例，成功率高达100%,其中有11例患者进行血性羊水培养并且取得成功

6、。178例患者的培养时间为9〜14do本研究中178例孕妇有10例胎儿染色体异常者，其中唐氏综合征阳性组占有1例结构异常和1例数目异常，占20%；高龄产妇组有3例数目异常，占30%；异常生育史组有1例结构异常，占10%；夫妇一方染色体异常组有2例染色体结构异常，占20%；超声检查异常组有2例数目异常，占20%o10例染色体异常者中，有6例数目异常，4例结构异常。178例孕妇中10例胎儿染色体异常，检出率为5.62%O3讨论导致新生儿出生缺陷的重要原因之一就是染色体病，然而，这可以通过产前诊断进行预防。在孕中期进行羊水检查，操作安

7、全便捷，细胞培养成功率相对较高，及早发现异常情况能够及时终止妊娠。有研究表明，胎儿染色体异常在对具有产前诊断指征孕妇中的异常检出率在3.8%〜7.7%[3]。本研究结果显示该组胎儿异常检出率为5.62%。据相关报道显示，35岁以上的孕妇胎儿出现唐氏综合征的几率15%〜31%,大部分均出现在>；35岁的孕妇群体中。这说明唐氏综合征血清学筛查尤为重要。对于年龄&ge；35岁的孕妇出现非整倍体的几率显著高于年龄<；35岁的孕妇，因此，对高龄产妇进行羊膜穿刺，进行羊水细胞培养检查必不可少：4]o为了预防和减少染色体异常胎儿出生，

8、作者认为产前诊断中进行羊水细胞培养意义重大。首先，产前诊断中进行羊水细胞培养能有效提高我国人口素质。本研究结果显示，胎儿染色体异常检出率为5.62%,对于这类胎儿，可以提前建议孕妇进行引产；其次，通过对孕妇年龄、游离&beta；人绒毛膜促性腺激素和血清甲种胎儿球