实验9 人类ABO血型检查

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1、实验9人类ABO血型检查与复等位基因的遗传平衡罗向东江西师范大学生命科学学院xdluolf@163.com1指导书:实验十五(P50)实验十六(P53)2一、实验目的通过实验掌握人类类ABO血型的检测方法,进一步理解和掌握基因座位（locus）和基因位点（site）的关系，复等位基因、基因共显性概念通过实验进一步理解Hardy-Weinberg定律的原理。3血液的组成是：血浆：优良溶剂，含蛋白质、葡萄糖、无机盐、代谢产物、O2、CO2血液　　　　　红细胞：含血红蛋白，容易和O2和CO2结合血细胞　白细胞：具免疫（淋巴细

2、胞），吞噬机能血小板：止血，凝血血型：指红细胞上所含抗原的不同，应用抗原与抗体的反应，产生凝集与否，对血型进行判断：二、实验原理45血型基因型抗原(红细胞上)抗体(血清中)血清血细胞ABIAIBAB—不能使任一血型的红细胞凝集可被O,A,B型的血清凝集AIAIAIAiA可使B及AB型的红细胞凝集可被O及B型的血清凝集BIBIBIBiB可使A及AB型的红细胞凝集可被O及A型的血清凝集Oii—可使A,B及AB型的红细胞凝集不能被任一血型的血清凝集人类ABO血型的表型和基因型及其凝集反应输血时，红细胞的性质比血清的性

3、质更为重要，因为血清中的抗体不仅可被不亲和的组织吸收，同时可被受血者的血浆稀释，使供血的浓度大大降低，不足以发生凝血反应。6输血原则：同血型者可以输血；O型血者可以输给任何血型的个体；AB型的人可以接受任何血型的血液；AB型的血液只能输给AB型的人。7参试人员的手指毛细管血液两滴三、实验材料显微镜、载玻片、抗A、抗B、消毒药棉、70％乙醇、一次性采血针四、仪器药品81.在载玻片上划分两格，分别标明A与B，如下图：2.用70%酒精药棉消毒手指采血部位（一般为无名指末端），再用此药棉消毒一次性采血针；3.用采血针刺手指，挤

4、出血液；一滴血液滴在A处，另一滴血液滴在B处；五、实验步骤AB94.在A处滴加抗A标准血清一滴，在B处加抗B标准血清一滴；5.分别用采血针调匀，调匀一处血液后揩擦采血针，再调另一处；6.两分钟内肉眼观察反应结果，或用最低倍显微镜观察其凝聚的情况，反之可能产生假凝集现象。五、实验步骤10血型抗A试剂抗B试剂A＋－B－＋O－－AB＋＋＋：表示凝集反应；－：表示无凝集反应五、实验步骤117.复等位基因遗传平衡的检验本实验以人类ABO血型为例，说明平衡群体中3个复等位基因IA、IB、i基因频率的计算和平衡的检验。设：复等位基因

5、IA、IB、I的频率分别为p、q、r。如果群体平衡,那么其表型、基因型及其频率满足下表12基因型IAIAIAiIBIBIBiIAIBii观察的表型频率A'B'(AB)'O'预计的表型频率P2+2prq2+2qr2pqr2p+q+r=1p2+q2+r2+2pq+2pr+2qr=113按下列公式从实际观察得到的血型（表型）平率资料中分别计算p、q、r。i基因频率r=√O'IB基因频率q=1－√A'+O'因为A’+O’=p2+2pr+r2=(p+r)2=(1－q)2所以１－q=√A'+O'则q=1－√A'+O'14IA基因频

6、率p=1－√B'+O'因为B’+O’=q2+2qr+r2=(q+r)2=(1－p)2所以１－p=√B'+O'所以p=1－√B'+O'15现以实例说明某次ABO血型调查结果与hardy—weinberg平衡相适合的程度。资料来自某城市随机抽样6000个中国人的ABO血型的调查，其分布及其相关计算如下表血型ABABO总计数目（O）1920162760718466000频率0.32000.27160.101160.30766116基因频率：r=√O'=√0.30766=0.55486p=1－√B'+O'=1－√0.27116

7、+0.30766=0.2392q=1－√A'+O'=1－√0.3200+0.30766=0.2059417下面就此随机样本做χ２检验预计数（C）N(p2+2pr)N(q2+2qr)N(2pq)N(r2)观察数1926163859418426000(O－C)2/C0.0190.0740.2850.0090.387χ２=0.387查χ２表，这里要注意，由于计算预计的４中血型频数时，需要从实得资料中计算基因频率p、q（３个基因频率的变数中，只有任意两个是独立变数），自由度应再减去２，所以df=3-2=1,从表中可以查到χ２d

8、f=1,p=0.05=3.841，而对应的χ2=0.387的p值大于0.05，表明此样本符合hardy—weinberg定律。18六、作业1.确定自己的血型2.表述全班ABO血型频率3.检验复等位基因是否平衡。2008、2009、2010年结果A:48+42+64=154B:52+43+41=136AB:9+11+18=38O:4