实验三 粪便隐血试验

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1、实验三粪便隐血试验【目的】掌握粪便隐血试验（OBT）邻联甲苯胺法的方法及其评价。【原理】血红蛋白中的亚铁血红素有类似过氧化物酶的活性，能催化过氧化氢分解释放新生态氧，将受体邻联甲苯胺氧化成邻甲偶氮苯而显蓝色。一、邻联甲苯胺法【操作】1．制备涂片2．滴加试剂3．结果判断4．报告方式二、单克隆抗体胶体金法【目的】熟悉隐血试验的单克隆抗体胶体金检测法。【原理】胶体金是由氯化金和枸橼酸合成的胶体物质，具有胶体化的性质，呈紫红色。特制的乙酸纤维膜上含均匀分布的胶体金标记的羊抗人Hb单克隆抗体和无关胶体金标记鼠IgG，膜的上端由上至下依次包被羊抗鼠IgG抗体和羊抗人Hb多抗。

2、检测时，试纸条浸入被检的稀释粪便液中，粪便悬液通过层析的作用，沿着试纸条上行，如粪便中含有Hb，在上行过程中与胶体金标记羊抗人Hb单克隆抗体结合，待行至羊抗人Hb多抗体线时，形成金标记的抗人Hb单抗-粪Hb-羊抗人Hb多抗复合物，在纸条上显现一条紫红色线，即为隐血试验阳性；试带上无关的金标记鼠IgG随粪便悬液上行至羊抗鼠IgG处时，与之结合形成又一条紫红色线，为阴性对照线（试剂质控线），即隐血试验阳性时试带出现2条紫红色线，如果只显现1条紫红色线为隐血试验阴性，试带无紫红色线出现即说明已失效。【操作】1．制备粪便悬液2．浸试带3．结果判断4．报告方式【注意事项】1

3、．实验所用的器材用具要清洁、干净无酸碱残留，无铁剂、血迹等污染。2．试剂（1）化学法试剂：H202最好新鲜配制，做标本检测时应做阴、阳性对照试验。（2）金标试纸质量：如试纸渗透性差，粪液渗透不良，可造成假阴性。3．结果分析（1）化学法：①反应时间不足，尤其温度低时；②粪便中存在抑制过氧化物酶的物质；③粪便留取时间较长，血红蛋白被细胞分解。（2）胶体金法：①上消化道出血患者有时可因为血红蛋白经过肠道消化酶降解变性而不具有原来的免疫原性，单克隆抗体与血红蛋白抗原不匹配；②消化道出血过多，抗原过剩出现后带现象；③粪便留取时间较长，血红蛋白被细胞分解。