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1、药敏试验（扩散法）操作方法河南康星畜禽疫病诊断中心马长宇13333835742内容:一、药物敏感试验的目的与意义二、常用的药敏测定方法三、试验准备及用品四、药敏试验操作步骤五、结果观察六、影响药敏结果的因素一、概念抗菌药物敏感性试验（AST，简称药敏试验）：用于测试抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制作用。（1）MIC：体外能够抑制细菌生长的最低药物浓度，临床医师可以根据MIC确定药物剂量。通常达到稳态的血药峰浓度（Css）max应为MIC的4-8倍，重症感染以大于8倍为妥。（2）为方便临床给药，根据MIC提供一个定性的结果是必要的。临床医师根据敏
2、感、中介、耐药的提示结合MIC可以方便地制定用药方案。敏感（S）：表示该药物对细菌的MIC值低于常规剂量下的抗菌药物血液浓度或组织浓度4-8倍，可以用常规剂量治愈。中介（I）：表示该药物对细菌的MIC值接近于常规剂量给药后的血药浓度或组织药物浓度，细菌对该药的敏感性降低，但仍可用于生理性浓集部位的感染或使用高剂量药物进行治疗（注：必须考虑高剂量的安全性）。耐药（R）：表示该药物对细菌的MIC值等于或高于常规剂量下药物的血液浓度或组织浓度，细菌不能被该种药物抑制。意义：1、检测病原菌对各种抗生素的敏感性，指导临床合理用药。避免盲目用药、滥用药、大剂
3、量用药。2、监测耐药性，分析耐药菌变迁，了解某一地区致病菌的耐药变迁、流行病学调查及监控，控制和预防耐药菌株的流行3、为经验用药提供所选药物的参考依据，可预测抗菌治疗的效果。“敏感”治疗可能有效；“耐药”肯定失败4、新抗菌药的研究以下情况不需进行药敏测定：标本污染细菌，非致病菌引起已知某些抗菌药对某菌有良好的抗菌作用且很少有耐药菌产生已知细菌全部耐药的药物对营养要求高而不易生长的细菌二、常用的药敏测定方法1、扩散法：纸片法、牛津杯法、打孔法等。纸片法手工测试的方法，通过测试药物纸片在固体培养基上的抑菌圈的大小，判断细菌对该种药物是否敏感。目前临床
4、上广泛使用此法。定性2、稀释法：琼脂稀释法、液体稀释法（试管、微量）通过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况，判断其最低抑菌浓度（MIC）。自动化仪器均采用液体稀释法为药敏试验的方法。定量3、E测定法（Etest）：与扩散法相似，但药物包被于长塑料条上，能够精确测定MIC值。适于一些特殊病原菌的药敏测试，但价格较为昂贵。4、全自动药敏仪法：1、培养基MH肉汤（MHB）Mueller-HintonBroth用途：用于抗生素敏感试验配方：（g/L）牛肉粉2.0可溶性淀粉1.5酸水解酪蛋白17.5pH值7.4 ± 0.225℃原理：牛肉粉和酸水解
5、酪蛋白提供氮源、维生素和氨基酸；可溶性淀粉吸收有毒的代谢产物。用法：称取本品21.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟,备用。MH琼脂（MHA）Mueller-HintonAgar用途：用于抗生素敏感试验配方：（g/L）牛肉粉6.0可溶性淀粉1.5酸水解酪蛋白17.5琼脂17PH值7.3 ± 0.125℃原理：牛肉粉和酸水解酪蛋白提供氮源、维生素和氨基酸；可溶性淀粉吸收有毒的代谢产物；琼脂是培养基的凝固剂。用法：称取本品42.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟,待冷至50℃，倾入无菌平皿,备用
6、。1、是兼性厌氧菌和需氧菌药敏试验标准培养基2、如营养要求高可加0.5%羊血。3、平板直径为9cm。4、琼脂板厚度4mm。误差±1mm。5、4℃保存7天。营养肉汤（NB）NutrientBroth用途：一般细菌培养,转种,复壮,增菌等（GB标准）配方：（g/L）蛋白胨10牛肉粉3氯化钠5pH值7.2 ± 0.225℃原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；氯化钠能维持均衡的渗透压。用法：称取本品18.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装三角瓶或管, 121℃高压灭菌15分钟备用。营养琼脂（NA）NutrientAgar用途：一
7、般细菌培养,转种,复壮,增菌等（GB标准）配方：（g/L）蛋白胨10肉浸粉10氯化钠5琼脂20pH值7.2 ± 0.225℃原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；氯化钠能维持均衡的渗透压。用法：称取本品18.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装三角瓶或试管,121℃高压灭菌15分钟备用。MH肉汤（¥100）、MH琼脂（¥250）；营养肉汤（¥60）、营养琼脂（¥80）均可以生化试剂店买到。操作步骤：1、玻璃器皿的准备冲洗、包裹、灭菌、干燥2、记量、称取原料3、加热溶解4、校正PH值5、灭菌6、分装、包裹、备用2、药敏片1、单
8、药（一种成分）市场生化试剂店有售，也可自制。但含量及监测标准有严格界定。建议购买2、成药（复方成分）多种联合的抗菌药物制剂应以其成分中某
