仪器分析(大连理工大学) 5.5 毛细管电泳分析的应用

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1、第五章 毛细管电泳5.5.1离子化合物的分析5.5.2在生物化学中的应用5.5.3在手性化合物分离中的应用第五节 高效毛细管电泳的应用capillaryelectrophoresis,CEApplicationofHPCE2021/7/185.5.1离子化合物的分析1.阳离子分析迁移方向和电渗流方向一致;4.5min内分离了24种金属离子;阳极进样,阴极检测;具有很高的灵敏度。2021/7/182.阴离子分析阴离子电泳方向和电渗流方向相反、速率接近,分析时间长、效率低。质量小、电荷密度大的离子如:SO42-,Cl-,F-等,电泳速率大于电渗流,阳极端流出,在阴极端无法检测。加入

2、电渗流改性剂,十六烷基三甲基溴化胺等,使电泳方向和电渗流方向一致,可在3.1min内分离36种阴离子。阴极进样,阳极检测。2021/7/185.5.2在生物化学中的应用检测体液或细胞中某些代谢产物的分析。尿液中的氨基酸含量作为临床诊断糖尿病的辅助手段。采用毛细管区带电泳方式,在11min内分离17种药物。2021/7/18采用MEKC模式,鉴定违禁药物,效果优于HPLC法。2021/7/18氨基酸与蛋白质分析采用MEKC模式,在25min内分离了23种丹酰化氨基酸;HPCE可取代传统的氨基酸分析仪。问题:吸附和检测。2021/7/18蛋白质分析2021/7/18核酸分析及DNA

3、测序重要分析手段。图为酶解的双螺旋DNA限制性片段的分离。2021/7/185.5.3在手性化合物分离中的应用合成获得单一手性化合物相当困难。在528种手性合成药物中,61种以单一对映体形式销售,其他为外消旋体。检测分析也相当困难。研究热点。R-型反应停是安眠药,S-型致胎儿畸形。HPCE分离分析手性化合物的方法:加入手性选择剂,形成配合物的稳定常数有差异,结合HPCE的高效率。常用手性选择剂:环糊精及其衍生物,手性冠醚,手性表面活性剂(氨基酸衍生物,胆酸钠,牛磺脱氧胆酸及其钠盐,低聚糖等天然手性表面活性剂)。2021/7/18手性化合物分析利用手性冠醚的CZE模式分离利用手性

4、胶束的MEKC模式分离2021/7/18手性化合物分析Regan等利用CE研究了生物技术制备BCH-189(抗爱滋病药物)过程中的某些反应,如其中的有效成分(+)-BCH-189是在胞苷脱氨酶催化下经生物转化方法合成的,转化过程持续51h,可采用CE法分析监测转化过程中手性对映体转化(分离的手性选择试剂为二甲基-β-CD)。对映异构体随时间转化过程的HPCE分析监测谱图2021/7/18新进展(1)微型化整体化学分析系统(TAS)及TAS微型化在硅片上光刻出矩形槽作为毛细管,理论塔板数105/m。(2)联用仪器CE-MS。(3)阵列毛细管凝胶电泳应用于人类基因DNA测序;5~1

5、0万个基因,30亿个碱基对,目前最有效的DNA序列分析仪,10h/次;可同时电泳24个试样;速度1200碱基对/h,提高速度!100支毛细管阵列电泳;速度280碱基对/(h·支)。2021/7/18请选择内容结束第六章5.1毛细管电泳的基本原理5.2高效毛细管电泳仪5.3毛细管电泳的分离模式5.4影响分辨率的因素及操作条件选择5.5高效毛细管电泳的应用2021/7/18

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