中药质量控制新方法(TLC-彭维)

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1、薄层色谱法在中药质量分析中的应用彭维一、中药质量控制常用的分析方法容量分析定性：颜色反应沉淀反应气体生成气味变化定量：四大滴定法光谱法定性：UV、IR定量：UV、Flu（计算分析）色谱法定性：定量：常用的色谱分析方法薄层色谱法（TLC）柱色谱高效液相色谱法（HPLC）气相色谱法（GC）离子色谱高效毛细管电泳色谱（HPCE）高速逆流色谱（HSCCC）常用的薄层色谱法纸色谱正相色谱反相色谱薄板色谱分配薄层色谱吸附薄层色谱离子交换薄层色谱凝胶薄层色谱薄膜色谱聚酰胺薄膜电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳二、薄层色谱的基本参数比移值：Rf=原点中心至斑点中心的距离原点中心至溶剂前沿的距离R

2、f=0斑点仍在原点Rf=1斑点已到前沿相对比移值R(I.S)=Rf(I)/Rf(S)Rf在1~0之间前沿原点二、薄层色谱的基本参数分配系数（K）K=CL/CM容量因子（k‘=(1-Rf)Rf）k‘=0的组分Rf＝1，表示该组分不被固定相保留k‘=∞的组分Rf＝0，表示该组分不被流动相带走,完全被固定相保留在吸附或分配色谱中，在选定固定相后，就是要通过改变流动相的极性，改变容量因子，达到改变被分离物的Rf目的二、薄层色谱的基本参数理论塔板数（n）在选定了固定相、展开剂后，理论塔板数取决于吸附剂的粒度、均匀度、活度、及展开剂的流速、展开温度、湿度、展开方式n＝16（D/W

3、）2D为原点到前沿的距离；W为组分斑点宽度二、薄层色谱的基本参数分离度（R）R＝d(W1+W2)/2d为相邻两斑点间的距离W1和W2分别为相邻两斑点的宽度R>1.5时，两斑点达到基线分离三、TLC常用仪器自动铺板器三、TLC常用仪器三、TLC常用仪器自动点样器三、TLC常用仪器全自动多级展开仪三、TLC常用仪器自动喷雾器自动加热器三、TLC常用仪器TLC仪器四、薄层色谱的基本流程制备固定相样品溶液的制备色谱前衍生化薄层板活化展开展开定位显色滤纸或薄层板预平衡定性定量点样滤纸或薄层板预处理（一）TLC薄层板制备：将1份固定相和3份0.3~1.0%Na-CMC溶液（水、N

4、aOH溶液）在研钵中向一方向研磨混合，去除表面及内部的气泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2—0.3mm），取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟。即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。（二）供试品溶液的制备超声振荡法：采用溶剂超声提取出样品中待测成分，舍弃其他成分。加热回流法：采用溶剂回流提取出样品中待测成分，舍弃其他成分。溶剂萃取法：采用溶剂萃取出样品中待测成分，舍弃其他成分。注意：定性和定量的差别。（三）点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样

5、基线距底边1.0~2.0cm，点样直径为2~4mm，点间距离约为1.5~2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。（三）点样：使用的材料—点样器材定量点样毛细管（美国）微量注射器（针尖平头）自动点样器（四）展开：展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5—1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，等展开至规定距离（一般为10—15cm）

6、，取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。（五）显色自然光UV（254、366nm）荧光碘熏、氨熏喷显色剂（晾干或加热后）多次显色（五）专属性显色剂黄酮类：AlCl3试液香豆素类：氨熏、NaOH试液内酯类：硫酸乙醇液酚类：FeCl3试液五、TLC的固定相常用固定相或载体：硅胶G、硅胶CMC硅胶GF254、硅胶GF366硅胶H、硅胶R、硅胶P硅胶HF254、硅胶（60、40）硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。TLC常用固定相手工自制板：玻璃：1～2mm优质平板玻璃光洁、平整洗净至不挂水珠，晾干预制板：普通薄层板和高效薄层板商品硅胶G

7、（石膏作粘合剂）硅胶GF254（荧光剂）粘合剂：羧甲基纤维素钠水溶液（0.2％～0.5％）（一）TLC常用固定相的选择与应用固定相分离机制主要应用范围氧化铝吸附色谱生物碱、甾体、萜类、脂肪、芳香化合物硅胶未改性硅胶吸附色谱硅胶60三萜皂苷、香豆素、挥发油高纯硅胶60改性硅胶生物碱C2、C8、C18、RP板正相及反相CHIR（手性）配体交换色谱对映体的分离NH2板正相核酸、农药、酚类、嘌呤及衍生物、甾类、维生素类、磺酸类、羧酸类、磺嘌呤类等CN板正相及反相农药、酚类、防腐剂、甾类DIOL板弱阴离子交换色谱色谱甾类、激素类（一）TLC常用固定相的选择与应