红麻组培研究(秦先超)

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1、红麻高效再生体系优化及双价抗虫基因遗传转化的初步研究秦先超，祁建民"，方平平，林荔辉，陶爱芬，徐建堂1.福建农林大学作物遗传育种与综介利用教育部重点实验室,福州3500022•福建农林大学农业部东南黄红麻科学观测站，福州350002；摘要：红麻(Kenaf)为锦葵科(Malvaceae)木槿^(Hibiscus)—年牛韧皮纤维作物，是麻纺和造纸工业的重要原料。红麻的抗除草剂和抗虫特性的获得，不仅能降低红麻的生产成本，而且口J以提高产量和品质。本试验在优化红麻的高效再纶系统的同吋，通过对双价抗虫基因转化红麻子叶，将外源抗虫基因整合到了红麻基因组DNA屮。成熟的红麻高效再生体系技术，在缩

2、短红麻冇种年限的同时，也可为红麻转基因等分子育种奠定基础；农杆菌介导的红麻遗传转化研究也为今后更进一步的转基因育种工作奠定了基础。1.红麻高效再生体系优化的研究结果：(1)在通过诱导愈伤组织产生，进而诱导不定芽形成的途径中，花药、了叶、下胚轴3种外植体屮，花药诱导的愈伤组织质量最好，下胚轴次之，了叶最差；花药愈伤组织的最佳诱导培养基为:MS+2,4-D(2.0mg/L)+KT(1.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)；(2)以子叶和下胚轴为外植体诱导愈伤组织时，愈伤组织的最佳培养基为MS+6-BA(3mg/L)+NAA(1mg/L):最佳分化培养基为MS+6-BA(1mg/L)+2

3、,4-D(1mg/L)+GA3(lmg/L)；(3)在愈伤组织分化培养基中添加0.3%的活性炭，可以诱导少量的不定芽，但同时也会诱导产生人暈的根；(4)在通过诱导外植体形成胚状体，进而直接诱导不定芽的途径中，下胚轴几乎不能诱导不定芽产牛，子叶的不定芽诱导效果较好；子叶不定芽诱导的最佳培养基为MS+TDZ(0.1mg/L)+NAA(O」mg/L)+AgNO3(1mg/L)；(5)在3个红麻品种间，福红992的不定芽诱导率最高，福红航1号次Z,福红952M差；2.农杆菌介导的双价抗虫基因转化红麻福红992的研究结果：(1)提取用于转化的工程菌的质粒，通过分子验证得到质粒中携带有双价抗虫基

4、因Bt和pta；(2)通过抗除草剂对红麻的临界浓度的筛选，得到Basta对红麻品种福红992了叶的致死浓度为7mg/L,此浓度为转基因过程中红麻选择培养时Basta的使用浓度;(1)对农杆菌侵染后的福红992子叶进行选择培养，得到了抗性不定芽；提取抗性不定芽的基因组DNA,并采用双价抗虫棊因Bl和pta的特异引物进行PCR验证，得到了680bp的Bt片段和804bp的pta片段：(2)对红麻品种福红992的98个子叶进行转化，得到了12个抗性不定芽；这12个抗性不定芽中，冇1个阳性植株，子叶的转化率为1.02%。关键词：红麻；不定芽；农杆菌介导；Br；piaThepreliminar

5、ystudyofkenafefficientregenerationsystemoptimizationanddoubleinsectresistantgenestransformationQINXian-Chao,QIJian-Min,FANGPing-Ping,LINLi-Hui,TAOAi-Fen,XUJian-TangKeyLaboratoryofMinistryofEducationforGenetics,BreedingandMultipleUtilizationofCrops,Fuzhou350002,China;^Correspondingauthor(email:q

6、ijm863@163.com)Kenaf(HibiscusCannahimisL.)ofMalvaceaefamilyisannualbastfibercropwhichisanimportantrawmaterialinlinenandpaperindustry.Kenafofherbicide-resistantandinsect-resistancecannotonlyreducetheproductioncost,butalsoimprovetheoutputandquality.Thisteststudiedtheeffectfactorsofcallusinduction

7、andadventitiousbudsdifferentiationofkenaf,optimizedtheefficientregenerationsystemofkenaf・MatureefficientregenerationsystemcanshortenthebreedingtimeofKenafqualityvariety,andlaidthefoundationfortransgenosismolecularbreedingofkenaf.I