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1、本试剂仅供研究使用大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)elisa试剂盒使用说明书试剂盒组成：48孔配置/96孔配置说明书：1份封板膜：2片(48)/2片(96)密対袋：1个目的：【大風血管性血更病因子/端斯托霉素辅因子(VWF)elisa试剂盒说明书】本试剂盒用于测定大鼠Ifil清，血浆及相关液依样本中Ifil管性1S1页病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)的含量。服务承诺：供货期：款到发货。工作时间内免费的技术咨询和指导。请来电咨询为客八提供來样检测服务，最大限度实验结果的有效性(免费代测)。试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相
2、关系数R值为0.95以上。2.批内与批见应分别小于9%和11%保存条件及有效期：1.试剂盒保存：2-8°Co2.有效期：6个刀检测范围：0.21U/L-6IU/L试剂盒组成：酶标包被板1X481X962・8°C保存标准品：2700ng/L0.5mlX1瓶0.5mlXI瓶2・8°C保存标准品稀释液1.5mlXI瓶1.5mlXI瓶2・8°C保存酶标试剂3mlXl瓶6mlXl瓶2-8°C保存样品稀释液3mlXl瓶6mlXI瓶2-8°C保存显色剂A液3mlXl瓶6mlXl瓶2・8°C保存显色剂B液3mlXl瓶6mlXl瓶2・8°C保存终止液3mlXl瓶
3、6mlXl瓶2-8°C保存浓缩洗涤液(20mlX20倍)XI瓶(20mlX30倍)XI瓶2-8°C保存实验原理:【大鼠血管性血页病因子/瑞斯托霉素舖因子(VWF)elisa试剂盒说明书】本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本小大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子（VWF）水平。用纯化的大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子（VWF）抗体包被微孔板，制成固相抗体,往包被单抗的微孔屮依次加入血管性血友病因子/瑞斯托霉索辅因子（VWF），再与HRP标记的血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子（VWF）抗体结合，形成抗体•抗原■酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加
4、底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子（VWF）呈正和关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（0D值），通过标准曲线计算样品中大鼠血管性血友病因子/瑞斯托每素辅因子（VWF）浓度。样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10・20分钟后，离心20分钟左右（2000-300
5、0转/分）。仔细收集上清，保存过程屮如有沉淀形成，应该再次离心。3•尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，川无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000・3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如冇沉淀形成，应再次
6、离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8°C的温度。加入一淀量的PBS（PH7.4）,川手工或匀浆器将标木匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6.标木采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于・20°C保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设
7、标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100卩1,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50gl,混匀；然后从第一孔、笫二孔中各収100Ml分别加到笫三孔和笫四孔，再在笫三、笫四孔分别加标准品稀释液50卩1,混匀；然后在第三孔和第四孔屮先各取50卩1弃掉，再各取50卩1分别加到第五、第六孔屮，再在第五、第7弋孔屮分别加标准品稀样液50ul,混匀；混匀后从第五、第六孔屮各取50卩1分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50）11,混匀后从笫七、笫八孔中分别取50卩1加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加标准品稀释液50川
8、，混匀后从笫九第十孔中各取50川弃掉。（稀释后各孔加样量都为50卩1,浓度分别为1800ng/L,1200ng/L,600ng/L,300ng/L,1
