本试剂仅供研究使用

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1、本试剂仅供研究使用大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)elisa试剂盒使用说明书试剂盒组成：48孔配置/96孔配置说明书：1份封板膜：2片（48）/2片（96）密封袋：1个目的：【大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)elisa试剂盒说明书】本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)的含量。服务承诺： 供货期：款到发货。工作时间内免费的技术咨询和指导 。请来电咨询为客户提供来样检测服务，最大限度实验结果的有效性(免费代测)。试剂盒性能：1.样品线性回

2、归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。2.批内与批见应分别小于9%和11%保存条件及有效期：1.试剂盒保存：2-8℃。2．有效期：6个月检测范围：0.2IU/L-6IU/L试剂盒组成：酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：2700ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8

3、℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存实验原理：【大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)elisa试剂盒说明书】本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)水平。用纯化的大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)，再与HRP标记的血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)抗体结合，形

4、成抗体-抗原-酶标抗体复合物3，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)浓度。样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠

5、檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细

6、胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7

7、.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔

8、中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L，600ng/L，300ng/L，150ng/L）。2.加样：分别设空