中和剂鉴定试验

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1、中和剂鉴定试验2.1.1.5.1目的确定所选中和剂是否适用于拟进行的细菌和真菌杀灭试验。2.1.1.5.2试验器材（1）试验菌菌悬液和菌片（见2.1.1.2）o（2）刻度吸管（1.0ml、5.0ml）。（3）小平皿（4cm〜6cm直径）。（4）恒温水浴箱。（5）稀释液：见附录A。（6）胰蛋白豚大豆琼脂培养基（TSA）:见附录A。（7）电动混合器2.1.1.5.3试验设计原则（1）通过所设各组试验结果综合分析，应可确定所用中和剂是否对测试消毒剂有良好的中和作用，对试验用细菌以及其恢复期培养是否有害或不良影响。（2）在确定用何种中和剂进行鉴定试验有困难吋，可对

2、多个中和剂进行初选以确定（见本款文后【附】）。（3）试验中所用消毒剂的浓度应以杀菌试验中使用的最高浓度为准。浓度过低，则不足以显示能否将高浓度消毒剂全部中和。（4）鉴定试验中，消毒后去除残留消毒剂组（第2组）无菌生长，不能表明中和后受到消毒剂作用后的细菌是否能恢复生长。细菌是否复苏。此时可适当缩短作用时间重新进行试验，但作用时间最短不得少于30s,否则难以控制试验的准确性。若缩短作用时间后仍无菌生长，在排除其他原因的基础上，可适当下调杀菌试验中消毒剂浓度,再次进行中和剂鉴定试验。(5)同一消毒剂拟对多种微&物进行杀灭试验时，应按微牛物种类分別进行鉴定试验。

3、对细菌繁殖体，在大肠杆菌(8099)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538)、铜绿假单胞菌(ATCC15442)中任选其一进行试验即可；对细菌芽抱，以枯草杆菌黑色变种(ATCC9372)芽抱进行。当用其他特定微生物进行杀灭试验时，均应以该特定微生物进行中和剂的鉴定试验。(6)鉴定时根据所用杀菌试验方法，使用相应的悬液或载体定量试验。【附】中和剂初选试验中和剂鉴定试验前，若难确定拟检测的中和剂，可通过本试验初选,而后以选中的中和剂进行正式的鉴定试验。初选操作程序如下：(1)将0.5ml试验菌悬液(含菌量为lX10'cfu/ml〜3X103cfu/ml)加入含4.

4、5ml中和剂试管中，混匀，作用30min后，取1.Oml接种平皿，用TSA倾注法培养。(1)将0.5ml试验菌悬液(含菌量为1X103cfu/ml—3X103cfu/ml)加入含4.5ml中和产物试管中，混匀，作用30min后，取1.0ml接种平皿，用TSA倾注法培养。（3）试验同时设阳性对照组。阳性对照组以0.5ml菌悬液加入含4.5ml稀释液试管中，混匀，作用30miri后，取1.0ml接种平皿，用TSA倾注法培养。当3组平板上长出的菌落数接近，如果以阳性对照组为标准（X）,前两组长菌数为（X±50%X）以内，可进行正式的鉴定试验。2.1.1.5.4试

5、验分组第1组消毒剂+菌悬液一培养观察消毒剂对试验菌有无杀灭或抑制能力。第2组（消毒剂+菌悬液）+中和剂”培养观察残留消毒剂被中和后受到清毒剂作用后的试验菌是否能恢复生长。第3组中和剂+菌悬液一培养观察中和剂是否抑菌。第4组（消毒剂+中和剂）+菌液一培养观察中和产物，或未被完全中和的残留消毒剂对试验菌的生长繁殖是否有影响。第5组稀释液+菌悬液一培养作为菌数对照。第6组稀释液+中和剂+培养基一培养作为阴性对照。2.1.1.5.5中和剂悬液定量鉴定试验操作程序根据试验分组，准备足量试管和平皿，依次进行编号。将消毒剂按所需浓度配制好后，置20°C±l°C水浴中待用

6、。按2.1.1.2制备试验菌悬液。取2.Oml试验菌悬液于试管中，加入2.0ml有机干扰物质，制成含有机干扰物质的菌悬液，置20°C±l°C水浴中备用。(1)第1组。吸取l.Onil含有机干扰物质的试验菌悬液于试管内，置20oC±loC水浴中5min后，再吸加4.0ml消毒剂于试管内，混匀。作用至预定时间，吸此样液0.5ml加于含有4.5ml稀释液的试管中，混匀。吸取该最终样液1.0ml,接种于平皿中，做活菌培养计数。(2)第2组。吸取1・0ml含有机干扰物质试验菌悬液于试管内，置20°C±l°C水浴中5min后，再吸加4.0ml消毒剂于试管内，混匀。作用

7、至预定时间，吸此样液0.5ml加于含4.5ml中和剂溶液管中，混匀，作用10mino吸取该最终样液1.0ml,接种于平皿中，做活菌培养计数。如平板生长菌落数均超过300个，应以稀释液对上述最终样液作适宜稀释后，再次进行活菌培养计数。(3)第3组。吸取0.lml含有机干扰物质的试验菌悬液于试管内，置20°C±l°C水浴中5min后，加入0・4ml硬水，混匀。加入4.5ml中和剂，作用lOmino用中和剂做10倍系列稀释，选适宜稀释度悬液，各吸取l.Onil,分别接种于平皿中，做活菌培养计数。（4）第4组。吸取0.1ml含有机干扰物质的试验菌悬液于试管内，置2

8、0oC±loC水浴中5min后，吸加4.9ml中和产物溶液（以0.