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1、第二部分酶的应用实验6α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测实际问题：实验6α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测②溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，提高了生产成本，且不利于工业化使用。①酶在水溶液中很不稳定。③反应后酶会混在产物中，可能影响产品质量。解决方法将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在不溶于水的载体（即介质）上，使之不溶于水而又有酶的活性。使用时将固定在载体上的酶与反应物接触，催化反应后与产物分离，这样酶可以被反复利用，被称为固定化酶。酶的固定化方法固定化后酶性质的变化固定化酶的应用实例α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测实验6α-淀粉酶的固定化

2、及淀粉水解作用的检测酶制剂的提取和优点课后练习1、酶制剂的概念和种类酶制剂的提取和优点含有酶的制品①定义：多酶片、加酶洗衣粉中的蛋白酶和脂肪酶②种类：A、液体酶制剂治疗某些胃病的胃蛋白酶液B、固体酶制剂2、酶的生产①提取法采用一定的技术直接从动植物或微生物的组织、细胞中将酶提取出来实例：在屠宰厂，可以从家畜胰脏中提取出胰酶；在水果加工厂，可以从菠萝皮中提取出菠萝蛋白酶②发酵法（常用方法）通过微生物发酵获得酶实例：果胶酶（黑曲霉、苹果青霉）3、酶制剂的优点催化效率高、低能耗、低污染等酶的固定化方法1、吸附法：通过载体表面和酶分子表面间的次级键（氢键、疏水键等）相互

3、作用而将酶吸附到固体吸附剂表面的方法。固体吸附剂多为活性炭、多孔玻璃等。2、包埋法：将酶包埋在高分子凝胶细微网格中或高分子半透膜中。分网格型、微囊型两种。（聚丙烯酰胺包埋最常用）酶的固定化方法3、共价偶联法：酶的功能基团和固相支持物表面上的反应基团之间形成共价键，从而将酶固定在支持物上。4、交联法：不使用载体，利用双功能或多功能试剂在酶分子间、酶分子与惰性蛋白间以及微生物细胞间进行交联反应，把酶分子彼此交叉连接起来，形成网络结构。（利用共价键）四种固定化酶制备方法小结物理吸附包埋法共价偶联法交联法制备易易难难结合力弱强强强酶活力高高中中底物专一性无变化无变化有变

4、化有变化再生可能不可能不可能不可能固定化费用低中高中制法特性固定化后酶性质的改变1、固定化对酶活性的影响：酶活性下降，反应速度下降（1）操作稳定性提高；2、固定化酶对酶稳定性的影响：提高（2）贮存稳定性比游离酶大多数提高；（3）对热稳定性，大多数升高，有些反而降低；（4）对变性剂的耐受力升高。固定化酶的应用实例——固定化酶技术生产高果糖浆葡萄糖果糖反应柱固定化酶分布着小孔的筛板固定化酶反应柱（葡萄糖异构酶）1.如何制备固定化酶？将酶固定在一种颗粒状的载体上，再将这些酶颗粒装到一个反应柱内。柱子底端装上分布着许多小孔的筛板，酶颗粒无法通过筛板上的小孔，而反应溶液却

5、可以自由出入2.如何使用？生产过程中，将葡萄糖溶液从反应柱的上端注入，使葡萄糖溶液流过反应柱，与固定化葡萄糖异构酶接触，转化成果糖。从反应柱的下端流出。固定化酶的应用实例葡萄糖果糖反应柱固定化酶分布着小孔的筛板固定化酶反应柱（葡萄糖异构酶）3.有何优点？反应柱能连续使用半年，大大降低了生产成本，提高了果糖的产量和质量。——固定化酶技术生产高果糖浆一定浓度的底物——淀粉溶液经过固定化酶柱，水解产生糊精。1、实验原理：淀粉糊精石英砂α-淀粉酶反应柱分布着小孔的筛板(1)制备固定化α-淀粉酶用吸附法将α-淀粉酶固定在石英砂上。(2)固定化α-淀粉酶催化的反应(3)淀粉

6、水解的检测用淀粉指示剂溶液——KI—I2溶液测试。淀粉遇碘显蓝色，而水解产物糊精遇碘呈红色。α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测淀粉水解过程α-淀粉酶淀粉糊精遇碘显蓝色β-淀粉酶麦芽糖糖化淀粉酶葡萄糖遇碘显红色遇碘不显色这里使用的是枯草杆菌的a-淀粉酶，其作用的最适温度为50~75℃；最适PH为5.5~7.52、实验材料：α-淀粉酶（取自枯草杆菌，最适pH5.5～7.5；最适温度50～75℃）3、实验试剂、用具：蒸馏水、KI—I2溶液、石英砂、可溶性淀粉溶液50ml烧杯3、滴管、自行车气门心及夹子和5mL注射器（层析柱）、注射器架（铁架台）、试管3、玻璃棒、纱

7、布α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测反应柱固定化酶气门心夹子5ml注射器淀粉4.实验步骤α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测1、α-淀粉酶的固定化。①在烧杯中，将5mgα-淀粉酶溶于4ml蒸馏水（用50ml的烧杯）。②再加入5g石英砂（石英砂体积：4ml），不时搅拌。③搅拌30min后装入1支下端接有气门心并用夹子封住的注射器中（用固定化酶的注射装备—层析柱）（在层析柱底部内部的管口处，放上2层纱布或尼龙布，防止石英砂落入层析柱底部的关口中，堵住管口）。④用10倍体积的蒸馏水洗涤此注射器以除去未吸附的游离淀粉酶，流速为1ml/min。为什么要不时搅拌？流速

8、怎么控制？4.实验步骤α