微生物实验细菌的培养及培养基的制备

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1、要求：实验报告于下周四前交与学委肖磊处。思考题可参阅书籍、网络等尽可能找到正确答案。实验一、培养基的制备技术实验内容1•培养基制备的基本过程：1)•调配成分：根据需配制培养基的量，量取一定量的蒸馆水，先倒部分水于烧杯或三角烧瓶中，再按培养基处方量称取各成分置于容器内，充分混匀，最后补足水分。2)•溶解电炉加热3)•校正PH:7.2—7.64)分装★营养肉汤：每管3ml-分装后高压灭菌★半固体：试管高度的1/4〜1/3-分装后高压灭菌取出直立★斜面：试管高度的1/4〜1/3-分装后高压灭菌，取出后摆成

2、斜面★琼脂平板：厚3mm-4mm-高压灭菌后冷至50°C倾注平板5).灭菌：高压蒸汽灭菌-121°C20分钟。2•配制说明：培养基以一个大组为单位进行配制，每人保证一份，两种固体培养基一块配制，先分装斜面，剩余高压灭菌后倾注平板。思考题：高压蒸汽灭菌的灭菌原理及适用对象。实验二、细菌培养与接种技术实验内容］菌种:金黄色葡萄球菌大肠埃希菌铜绿假单胞菌乙型溶血性链球菌（A群链球菌）枯草芽胞杆菌2.接种方法血平板一四分区划线，接种金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌。营养琼脂平板一四分区划线，接种金葡和铜绿假单胞菌

3、。麦康凯平板-四分区划线，接种大肠、铜绿、金葡和A链。斜面一连续划线（密而不重），接种铜绿假单胞菌。半固体一穿刺（需一次进行），接种大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌。液体培养基T接种金葡、A群链球菌和枯草芽砲杆菌。3•培养方法：需氧培养4.达到目的：掌握各种接种方法及无菌操作要领，树立和牢记无菌操作的意识。思考题：1・固体、半固体、液体培养基的各自用途。2•麦康凯平板的用途及原理。实验三、细菌生长现象观察与革兰染色1、细菌生长现象的观察1）固体培养基a平板培养基：菌落描述：颜色、大小、表面、边缘、湿润程度

4、、溶血现象、色素、特殊气味等。b斜面培养基：观察菌苔特征。2）液体培养基：混浊生长、沉淀生长、和表面生长。3）半固体培养基：观察细菌是否有动力。2、细菌涂片的制作过程涂片—干燥—固定3、革兰染色的原理1）细胞壁结构学说2）细菌等电点学说3）化学学说—核糖核酸镁盐4、革兰染色的方法初染—媒染m脱色—复染5、染色结果的观察6、影响染色结果的因素思考题：1・描述半固体接种大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌；液体培养基接种金葡、A群链球菌和枯草芽砲杆菌；血平板接种金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌培养后的生长表现。2•革兰

5、氏染色的原理。3•影响染色结果的因素