临床医学毕业论文苦瓜多糖的提取与含量测定

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1、XX大学毕业论文苦瓜多糖的提取与含量测定姓名：2014年6月25日苦瓜多糖的提取与含量测定【摘耍】以水捉醇沉法从苦瓜屮捉取得到苦瓜多糖，采用苯酚■硫酸法测定其多糖含量，以止交实验优化显色条件。确定5%苯酚用量1.0ml,浓硫酸用量7.Oml,反应吋间30min。标准曲线回归方程为A=0.043.2C-0.0059,1=0.999l（n=6）,在2.5〜30.0mg/L范围内呈良好线性关系。平均冋收率为97.2%,RSD=1.71%（n=5）o测得多糖平均含量为2&6%,RSD=1.84%（n=6）0

2、该法简单、准确、稳定,可为英继续研究开发及应用捉供参考依据。【关键词】苦瓜；多糖；提取；苯酚■硫酸法；含量测定苦瓜（MomordicaCharantiaL.）X名凉瓜、癫瓜、癫葡萄、锦荔枝等,是葫芦科苦瓜屈植物的果实。它具有良好的食用价值和明显的药用功能，素冇“药用蔬菜”Z称。现代约理学研究表明，苦瓜有消暑解热、明冃解毒、舒张血管、抗心率失常、抗癌、增强机体免疫力等作用。《中国药典》2005年版I部等冇关资料,均未对苦瓜多糖进行定量检验。木文研究了苯酚硫酸法测定苦瓜多糖含量的方法，以正交设计优化显色

3、条件，对开发、利用苦瓜资源具有一定的参考价值。1仪器与试药⑴仪器:UV-2401PC紫外可见分光光度计（日木岛津）;RE-52AA型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；800型离心沉淀器（上海手术器械厂）;KW-200B型高速药物粉碎机（山东青州市精诚机械冇限公司）。（2）试药苦瓜药材（购于浙江浙江中医药大学实验药厂）,乙醇、硫酸、氯仿、止丁醇、乙瞇、丙酮等试剂均为分析纯，苯酚（AR.重蒸后使用），实验用水为蒸惚水。2方法2.1多糖的提取取干燥的苦瓜粉末10g,加入80%乙醇100ml,加热回流2次，

4、每次1h,弃提取液。滤渣挥去乙醇后，用40倍水分三次冋流提取，分别提取1.5h、0.5h、0.5h,合并滤液，浓缩。浓缩液中加入乙醇至含醇量达到80%,边加边搅拌，得灰白色沉淀。静置12h后离心分离沉淀，取固体部分再重复溶解、沉淀、离心分离操作至乙醇液澄清无色为止。沉淀以少许蒸镭水溶解,加入等体积的体积比4：1的氯仿/正丁醇混合液，振荡20min,静置，取上清液重复以上操作3次去除蛋白。收集清液再加入4倍乙醇醇析，取沉淀用乙瞇、丙酮反复洗涤，干燥，即可得苦瓜粗多糖固体。2.2含量测定(1)最人吸收波

5、长的选择:最人吸收波长的选择精密吸取225.1mg/L苦瓜多糖溶液1.0ml,g10ml容量瓶中，加入5%苯酚溶液1.0ml,混匀,冰浴下再加入7.0ml浓硫酸，混匀后室温下放置30min,以蒸憾水补至刻度,混匀。以蒸憾水替代多糖溶液如上法配制空白，在300〜600nm范围内扫描，确定最大吸收波长。确定最大吸收波长为524nmo(2)显色条件的选择：以显色剂5%苯酚用量、浓硫酸用量和反应间作为考察因索，采用正交设il-L9(33)优选最佳色条件，因索与水平见表1。结果见表2,可知，浓酸用量是影响显色

6、条件的最主要因素，显色剂用的影响次之,反应时间的影响相对较小。最佳显条件为A2B3C2,即5%苯酚1.0ml,浓硫酸7.5ml,反应时间30min。⑶标准曲线的制备:精密称取无水葡萄糖纯品62.5mg,定容250ml容量瓶中，分别吸取0.1,0.2,0.4,0.6,0.&1.0,1.2ml,按“最大吸收波长的选择''项下方法作，在最优的显色条件下分别测定吸光度。以葡糖浓度(mg/L)为横坐标，吸光度为纵坐标,绘制线，进行线性回归。得标准曲线的回归方程为A=0.043.2C0.0059,=0.999l

7、(n=6),在2.5〜30.0mg/L范围内呈良好线性关系。⑷样品的测定:精密称取同一苦瓜多糖样品6份各约4mg,容于10ml容量瓶，取1.0ml,按照制备标准曲的步骤测定其吸光度。根据回归方程计算多糖量(校正因了为0.9[1])o求得多糖平均含量29.4%oRSD=1.84%,表明本法测定苦瓜多糖复性好。(5)精密度实验:取同一份苦瓜多糖溶液，按上述实验确定的件分析样品，同吋平行测定6瓶,RSD二1.13%,见该法测定苦瓜多糖含量的精密度良好。(6)稳定性实验:为了考察苦瓜多糖的显色稳定性，对同一

8、样每隔5min作一次测定，共测12次。RSD=1.07%,本法对苦瓜多糖显色至少在1h内稳定。⑺回收率实验:采用加样回收率法，取苦瓜多糖溶液0.1mL份，分别添加已知含量的葡萄糖对照品溶液，测多糖含量。求得平均冋收率为97.2%,RSD=1.71%0表I正交因素水平（略）表2正交实验结果（略）3讨论多糖含量的测定至今大多采用Dubois等提出的苯酚硫酸比色法[1],It原理是多糖在浓硫酸的作用下水解成单糖，并迅速脱水成糠醛衍生物，此糠醛衍生物与苯酚缩合生成有色化合物。