丙型肝炎的病原学诊断

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1、丙型肝炎的病原学诊断中南大学湘雅医院感染病科谭德明●丙型肝炎是由丙型肝炎病毒引起的以慢性病毒性肝炎为主要表现的常见传染病●主要通过输血传播●病原学诊断主要依靠抗HCV、HCVRNA和HCV核心抗原的检测CE1E2/NS1NS2NS3NS4aNS4bNS5aNS5b血清丙型肝炎病毒抗体的检测ELISA1RIBA1C100C1005-1-1ELISA2RIBA2C22-3C33CC100C33CC1005-1-1ELISA3RIBA3C22-3C33CC33CC100C1005-1-1NS5NS5三代抗HCV检测试剂特点的比较试剂敏感

2、性※低感染人群高感染人群ELISA-17080%3050%7085%ELISA-29295%5061%8895%ELISA-397%75%NA※：与RT-PCR检测HCV-RNA的比较Positivepredictivevalue:与RIBA的比较抗HCV检测的临床意义●阳性时表示有HCV感染：包括既往感染，带毒者和丙型肝炎病人●抗HCV不是保护性抗体血清HCV-RNA的检测●血清HCV-RNA的定性检测-缺乏标准检测方法，通常采用定性RT-PCR敏感性较高，但特异性较差主要用于确定丙型肝炎病人的确定诊断●血清HCV-

3、RNA的定量检测-一般敏感性低于定性检测,但特异性较好主要用于抗病毒治疗的选择与疗效监测HCV-RNA定量检测方法及检测范围2202002,00020,000200,0002,000,000HCVRNAIU/mL1.RocheDiagnostics.MethodsManual.2.NationalGeneticsInstitute.SuperQuant™.3.BakerMB.HCVRNA3.0QuantitationbybDNA.4.BartnofHS,HerreraJ.AASLDAnnualMeeting.1999.520IU

4、/mL8×106IU/mLBayerbDNA3.0*3SuperQuant™†2100拷贝/mL108拷贝/mLBayerTMA†450拷贝/mLAMPLICORHCVMONITOR®Test*1600IU/mL500,000IU/mLAMPLICOR®HCVTest†150IU/mL线形范围动态范围*定量†定性我国主要采用实时荧光定量PCR方法检测HCVRNA●敏感性较差●有一定的假阴性或假阳性HCV核心抗原检测是一种新的检测手段,研究始于上世纪九十年代中期,2001年商品化,在临床研究应用主要检测方法有荧光酶免疫法(fluor

5、escentenzymeimmunoassay;FEIA),ELISA和放射免疫测定法(immuno-radiometricassay;IRMA)HCV核心抗原检测与HCVRNA测定有高度的一致性,可能也是一个反映HCV复制的血清学指标治疗当天,24小时后,7天,14天检测血清HCVRNA(CobasAmplicorHCVMonitortest,version2;RocheDiagnostics).serumHCVcoreAg,(LumipulseOrthoHCVAg;OrthoClinicalDiagnostics,Tokyo,

6、Japan)观察早期病毒学应答与治疗效果(SVR)的关系健康人群乙肝患者丙肝患者（n=20）（n=20）（n=149）国产（湖南景达）HCV核心抗原试剂检测结果HCV核心抗原和HCVRNA结果比较分组阳性标本数符合率(%)HCV核心抗原（＋）/HCVRNA（＋）44/14929.53HCV核心抗原（—）/HCVRNA（—）37/14924.83HCV核心抗原（＋）/HCVRNA（—）30/149HCV核心抗原（—）/HCVRNA（＋）38/149HCV核心抗原，HCVRNA（＋）和HCV核心抗原，HCVRNA（—）/检测总标本数8

7、1/14954.36χ2=0.94,P>0.05丙型肝炎的病原学检测♦血清免疫学标志物:抗HCV(IgG,IgM)：ELISA；RIBAHCV核心抗原：ELISA♦血清分子生物学标志物:HCV-RNA:Qualitytest：nestedRT-PCR；TMA(transcription-mediatedamplification)Quantitytest：realtimePCR:bDNA（branchDNAhybridization)，Genotyping丙肝实验室病原学诊断要点(一)丙肝抗体检测用于筛查,但确诊需要HCV-RNA

8、的定性检测HCV-RNA的定性诊断敏感度高于HCV-RNA定量诊断,适合筛查后的确诊HCV-RNA定量检测有助于评估疗效和预测治疗预后丙肝基因型检测统一按照simmonds方法,HCV基因型将决定丙肝个体化治疗方案丙肝实验室病原学诊断要点(二)HC