肺癌诊断试剂与分子影像造影剂研制-药剂学专业毕业论文

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时间:2019-10-16

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1、摘要IAbstractIll序言1第一章肺癌早期筛查和体检试剂盒研制一——肿瘤标志物的筛选9引言91材料92方法113结果114讨论25第二章肺癌早期筛查和体检试剂盒研制二——试剂盒研制工艺及质量标准27序言271材料272方法303结果364讨论53第三章肺癌中晚期体内多肽分子影像造影剂的初步研究55序言551材料552方法583结果634讨论71结论与创新性73参考文献74攻读学位期间发表的论文及专利81致谢83肺癌诊断试剂与分子影像造影剂的研制研究生:刘大路导师:臧林泉教授专业:药剂学广东药学院药科学院摘要目的对于肺癌早期筛查和诊断,利用特异性与灵嫩性较高的NSE、CYFRA21-1等

2、肺癌相关标记物,采用斑点免疫杂交和混合ELISA技术研制肺癌体外联合诊断ELISA试剂盒;对于中晚期肺癌转移与预后的判断,利用本实验前期筛选获得的肺癌靶向结合多肽,经过化学修饰与结构优化,标记核素[,8F],研制出新型肺癌体内诊断分子显像剂,为屮晚期肺癌的临床预后转归、病程分子等判断、分子分型和个性化治疗提供更为准确的技术手段。方法利用斑点免疫杂交原理,在硝酸纤维素膜上筛查肺癌相关的多种相关标记物,发现标记物中NSE、CYFRA21・1两两组合对肺癌的诊断率最高,将NSE、CYFRA21-1两种抗原的抗体按一定比例组合包被到酶标板的板底,考察包被液、包被时间、包被温度、包被保护液等因素,己达

3、到试剂盒中酶标板的高效、稳定,同时考察检测抗体保护液的配方组成,显色液的反应等因素使整个双显色ELISA试剂盒更加稳定,确诊率更高。通过化学方法合成多肽修饰化合物(ZP)并标记异硫氧酸(FITC)荧光素。以不同肺癌、肺部疾病和肺部止常组织芯片鉴定多肽修饰化合物对肺癌的诊断阳性率情况;将ZP经尾静脉注射到荷瘤裸鼠体内,取心、肝、脾、肺、肾、脑、肿瘤组织,冰冻切片,观察ZP在不同组织中的荧光强度,确定其在体内的靶向性分布;用核素严F]标记ZP,制备化合物[18F]-ZP,将化合物注入荷瘤裸鼠体内,进行PET/CT全身成像,考察[18F]-ZP在荷瘤裸鼠体内的分布、代谢情况。结果NSE、CYFRA

4、21-1肺癌双显色ELISA诊断试剂盒4°C放置有效期为6个月。试剂盒CYFRA21-1灰区吸光度(0D)值范围就是0至0.38478之间,遇灰区患者是为可疑要复查。试剂盒CYFRA21-1正常值范围0至24.08ng/mL;试剂盒NSE灰区吸光度(OD)值范围就是0至0.4145之间,遇灰区患者是为可疑要复查。正常值范围0至9.8ng/mL。试剂盒灵敏性83.8%(129/154)、特异性53.8%(57/106)、准确性71.5%(186/260)o作为分子影像造影剂的化合物ZP合成产率高、纯度高;ZP-FITC肺癌组织芯片检测ZP的灵敏性50%(35/70)>特异性60%(3/5)、准

5、确性50.7%(38/75),ZP-FITC裸鼠体内在肺鳞癌和肺腺癌组织分布相比于其他组织明显偏高。核素严F]标记ZP过程可靠、技术成熟,将化合物注入荷瘤裸鼠体内,进行PET/CT全身成像,当注射后,肿瘤组织显像最为明显,将为肺癌的分子影像诊断和分子分型提供可靠的特异性示踪工具。结论利用肺癌患者、肺部正常疾病和正常人血清验证双显色试剂盒,证实其具有开发为新型肺癌诊断试剂盒的条件。通过肺癌组织芯片,荷瘤裸鼠组织切片,核素严F]标记ZP体内成像,证实核素严F]标记ZP具有一定的靶向性,为开发肺癌显像诊断试剂奠定了基础,也为开发靶向性药物的载体奠定了基础。关键词:肺癌;诊断;双显色试剂盒;[18F

6、]标记ZP;PET/CTTheresearchanddevelopmentoflungcancerdiagnosisreagentsandmolecularimagingreagentoflungcancerGranduateName:LiuDaluSupervisor:ProfZangLin-QuanMajor:pharmaceuticsGuangdongPharmaceuticsUniversityAbstractObjective:TodeveloptheinvitrodiagnosticELISAkitoflungcancerusinglungcancer-relatedmarker

7、sNSEandCYFRA21-1.Thatis,thisstudywasdesignedtodevelopanewmolecularinvivoimagingdiagnosticreagentbymarkingthepolypeptidesscreenedandobtainedpreviouslywithnuclide[l8F],thusprovidingamoreaccurateinvivodiagnost

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