酵母菌DNA的提取

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1、酵母DNA提取方法方法一：石英砂法1、5000rpm×5min收集过夜培养的菌体（5ml左右），于200μL裂解液(50mmol/LTris-HClpH8.0,180mmol/LEDTApH8.0,1%SDS,现配)中，加入3/10总体积石英砂在涡流混合器上振荡13min，每隔4min将离心管取出用力甩几下，然后65℃水浴10min。2、加入200μL5mol/LKAc，冰浴8min；3、12000rpm×5min转移上清至新的离心管中；4、加入3mol/LNaAc35μl，加入异丙醇200μL混匀后

2、冰浴8min，12000rpm×5min收集沉淀；5、200μLTE溶解，加入RNase10μL，65℃水浴10min；6、加入200μL氯仿－异戊醇（24:1）,抽提；7、温柔地取上清150μL，加入20μL3mol/LNaAc及375μL无水乙醇，混匀后12000rpm×8min收集DNA；8、70%乙醇洗涤沉淀，吹干后TE溶解，-20℃保藏。方法二：蜗牛酶法1.接种于5ml的YEPD培养基中在25℃-28℃振荡培养12-16h。2.3500rpm离心5min沉淀细胞，用1ml的无菌水洗涤一次，再

3、加0.5mlsolutionⅠ(1M山梨醇，0.1MEDTA,pH=7.5)重悬。3.转移细胞至1.5ml的离心管中，加入0.1蜗牛酶(30mg/ml)溶液，37℃保温30-60min,以获得原生质体。4.最大转速离心1min以沉淀细胞，用500ulsolutionⅡ(50mMTris-HCl,20mMEDTA,pH=7.4)溶液悬浮，然后加入50μl10%SDS,混合65℃保温30min。5.加入200μl5M醋酸钾，放于冰上30min。6.最大转速离心15min，转移上清液至新的离心管中，用等体积

4、的异丙醇沉淀DNA。7.室温下放置5min，离心10min，用70%的乙醇洗涤一次，真空干燥，用50ulpH=7.4TE溶液溶解。 方法三：蜗牛酶过夜处理法将酵母接种到YPD培养基中30℃过夜培养16～18h，离心收集1.5mL，用灭菌水洗涤两次；加入600μL裂解液，35μL蜗牛酶，37℃消化过夜；加入饱和酚450μL，氯仿-异戊醇(体积比24:1)150μL，轻轻颠倒混匀使溶液成为乳状，并保持10min，3000r/min离心10min；吸取上清液，用氯仿-异戊醇(体积比24:1)450μL再抽提

5、1次，10000r/min离心5min；取上清加入异丙醇800μL，－20℃静置30min；10000r/min离心5min，沉淀物用70%乙醇洗两次，自然干燥后溶于30μL TE缓冲液；加入0.5μL10mg/mL的RNaseA，37℃温浴30min，自然冷却后保存。 方法四：蜗牛酶反复冻融法收集过夜培养16～18h的菌体1.5mL，加入500μLPBS溶液重悬菌体，12000r/min离心2min，用PBS重洗一次；将沉淀溶于35μL的蜗牛酶溶液中，加入65μL的PBS，45℃作用2h，加100μ

6、L裂解液，－20℃冷冻，然后室温振荡溶解，反复3次；向悬浮液中加入150μL 5mol/L KAc(pH8.9)轻轻混匀，然后10000r/min离心5min；取上清液，加入两倍体积的无水乙醇，轻轻混匀，室温放置5min；12000r/min离心10min，将沉淀溶解在100μL TE中；加入等体积的酚-氯仿-异戊醇(体积比25:24:1)，轻柔颠倒混匀，12000r/min离心5min，重复抽提1次；加1/10体积的3mol/L醋酸钠(pH5.2)，2.5倍体积的无水乙醇，－20℃放置30min；1

7、0000r/min离心5min，弃上清液，用70%乙醇溶液洗涤沉淀两次，室温干燥后用20μL TE溶解；加入0.5μL 10mg/mL的RNaseA，37℃温浴30min，自然冷却后保存。 方法五：溶解在100μL TE中；加入等体积的酚-氯仿-异戊醇(体积比25:24:1)，轻柔颠倒混匀，12000r/min离心5min，重复抽提1次；加1/10体积的3mol/L醋酸钠(pH5.2)，2.5倍体积的无水乙醇，－20℃放置30min；10000r/min离心5min，弃上清液，用70%乙醇溶液洗涤沉淀

8、两次，室温干燥后用20μL TE溶解；加入0.5μL 10mg/mL的RNaseA，37℃温浴30min，自然冷却后保存。 方法六：1、配一个破菌缓冲液：TritonX-100    2%（v/v）    SDS    1%（w/v）NaCl    100mM    Tris-HCl（pH8.0）    10mM2、把酵母细胞离心收集，加200ul的石英砂或玻璃珠，加入200μl的破菌液再加200μl的酚氯仿，涡旋一分钟，放在冰上一分钟，一共反复4次3、