分子生物学复习课件

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1、考试安排时间：2009年12月15日14:00-16:00地点：研203（医学院、基础医学院）研204（其它学院）（注：除限用英文答题外，可任意使用中文和英文进行答题。欢迎全部用英文答题。）一、名词解释（6个，每个5分，共30分）二、问答题（7题，每题10分，共70分）（最后一题限用英文答题）用答题纸进行答题解链温度、增色效应DNA复性与哪些因素有关？为什么用C0t值来描述复性的进程？PartIR1.DNAdenaturation/DNA变性Tm(meltingtemperature)isthetemperatureatwhichthestrandseparationishalfcomp

2、lete.Hyperchromiceffect:a30%-40%increaseintheabsorbanceoflightat260nmafterDNAisdenatured.R2.DNARenaturation/DNA复性TheprocessthattwodenaturedDNAstrandscometogetheragainunderproperconditionsiscalledannealingorrenaturation.Renaturationisaffectedbyseveralfactors.Temperature:thebesttemperatureforrenatu

3、-rationofaDNAisabout25ºCbelowitsTm.DNAconcentration:withinreasonablelimits,thehighertheconcentration,thefastertheannealing.Renaturationtime:thelongerthetimeallowedforannealing,themorewilloccur.C0tcurveC0t10-610-510-410-310-20.11101001,00010,0001.00.50NucleotidepairsPolyUPolyAMS-2T4E.coliCalf(non-

4、repetitivefraction)Mousesatellite复性程度1101021031041051061071081091010举例说明融合蛋白在基因表达产物分离纯化中的作用。研究DNA-蛋白质相互作用有哪些实验方法？位点定向诱变的实验原理。PartIIR1.ExpressionvectorsthatproducefusionproteinsMCSO,PlacZ’O,P+StopcodonStopcodonStopcodonTranscriptionTranslationmRNAProteinNH2COOH(1)Oligo-histidineexpressionvectorFi

5、gure4.19aUsinganoligo-histidineexpressionvectorMCSEK（肠激酶识别序列）(His)6ATGPtrc为什么要在EK基因前加上6个组氨酸的编码序列呢？因为(His)6与金属镍有很高的亲和性。Lysecells-NiUsinganoligo-histidineexpressionvector-Ni咪唑Imidazole()-Ni肠激酶Enterokinase-NiUsinganoligo-histidineexpressionvectorR2.AssayingDNA-ProteinInteractionsFilterbindingGelmobi

6、lityshiftDNasefootprintingDMSfootprintingAnotheroftherecurringthemesofmolecularbiologyisthestudyofDNA-proteininteractions.E.g.,RNApolymerase-promoterinteractions.Therefore,weneedmethodstoquantifytheseinteractionsandtodetermineexactlywhatpartoftheDNAinteractswithagivenprotein.1.FilterbindingNC膜（ni

7、trocellulosemembrane）几十年前就开始用来过滤灭菌。0.22~0.65μm(bacteria:1-5μm)NC膜结合特性单链DNA：结合双链DNA：不结合蛋白质：结合双链DNA+蛋白质：结合核酸杂交中应用广泛Nitrocellulosefilterbindingassay如果某种蛋白质能使DNA留在膜上，说明它能与DNA发生结合。GelmobilityshiftassayGelmobilityshiftassay凝