人类白细胞抗原E基因全长序列测定及两个新等位基因的鉴定

《人类白细胞抗原E基因全长序列测定及两个新等位基因的鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、人类白细胞抗原E基因全长序列测定及两个新等位基因的鉴定何柳媚王宋兴徐筠娉深圳市血液中心深圳市组织配型与免疫遗传重点实验室摘要：背景:人类白细胞抗原E是非经典的人类白细胞抗原I类分子，目前的多态性分析研究主要针对其第3外显子人类白细胞抗原E*01:01及人类白细胞抗原E*01:03进行区分，然而其全基因序列测定方法及新等位基因报道尚不多见。0的:利用屮国深圳地区无偿献血正常个体建立人类白细胞抗原E基因全长序列测序分型方法，鉴定人类白细胞抗原E基因全长序列新的等位基因。方法:提取研究对象外周血DNA,根据1MGT/HLA

2、数据库中公布的人类白细胞抗原E基因序列,在保守区设计全基因扩增及测序引物，利用高保真反应体系对人类白细胞抗原E全长序列进行扩增，随后测序、拼接、序列确认及基因定型。结果与结论：(1)成功建立了人类片细胞抗原E的全基因扩增及测序分型方法，发现了两个人类白细胞抗原E新等位基因——人类白细胞抗原E*01:01:01:06与人类白细胞抗原E*01:01:01:07,获得了WHO人类白细胞抗原命名因子委员会的命名；(2)人类白细胞抗原E*01:01:01:06与其最接近的等位基因人类白细胞抗原E*01:01:01:01相比,突

3、变位点在5'-启动子区的NT-26(G->T),人类白细胞抗原E*01:01:01:07与其最接近的等位基因人类白细胞抗原E4：01:01:01:01相比,突变位点在3’-非翻译区的NT3345位(T->C);(3)结果提示，中国人群中人类白细胞抗原E全基因序列多态性数据有待填补，试验建立的方法为该项研究提供了关键的技术。关键词：干细胞;移植;人类口细胞抗原E;PCR-SBT;全慕因序列测定;新等位基因;多态性；作者简介：何柳媚，1980年生，广东省深圳市人，汉族，2005年暨南大学毕业,硕士，副主任技师，主要从事组

4、织配型与免疫遗传学研究。作者简介：徐筠娉，博士，副主任技师，深圳市血液中心，深圳市组织配型与免疫遗传重点实验室，广东省深圳市518035收稿日期：2017-05-27基金:广东省医学科研基金(A2016222)资助Identificationofgenomicfull-lengthsequenceofhumanleukocyteantigen~EanditstwonovelallelesHeLiu-meiWangSong-xingXuYun-pingShenzhenKeyLaborstoryofTissueTypin

5、gandImmunogenetics,ShenzhenBloodCenter;Abstract：BACKGROUND:Humanleukocyteantigen-E(HLA-E)isoneofnon-classicalHLAclassIgenes.Uptonow,thepolymorphismanalysisismainlyaimedatthevariationinexon3ofHLA-E,whichdeterminesHLA-E^Ol:01orHLA-E*01:03.However,theidentificatio

6、nofthefull-lengthIILA-Eanditsnovelallelesisrarereported.OBJECTIVE:ToestablishthemethodofidentificationofHLA-Egenomicfull-lengthsequence,andtoidentifyitsnovelallelesinhealthyblooddonorsinShenzhen,China.METHODS:PeripheralbloodDNAsampleswereextractedfromthesubject

7、s,andtheamplifiedprimersandsequcncingprimersinconservedregionsweredesignedaccordingtothesequencesofHLA-Epublishedinthe1MGT/HLAdatabase.Ahigh-fidelityreactionsystemwasusedtoamplifythegenomicfull-lengthofHLA-E,followedbysequencing,assembling,confirmingandtyping.R

8、ESULTSANDCONCLUSION:Herein,wesuccessful1yestablishedthemethodforamplifyinggenomicfull-lengthsequcnccandsequcnce-bascdtyping.TwonovelHLA-EalleleswerenominatedbyWHOHLANomencla