毕业设计与论文（烟色曲霉原生质体制备与紫外诱变）

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1、学士学位论文烟色曲霉原生质体制备与紫外诱变题目类别毕业论文系别生物工程系专业班级08014101学生姓名指导老师辅导老师起止时间2011年10月至2012年5月论文提交时间2012年5月目录摘要IV关键词IVAbstractVKeywordsVnus11.1材料41.1.1样品41.1.2实验试剂41.1.3酶41」.4仪器与设备41.1.5培养基41.2实验方法51.2.1筛选育种过程51.2.2出发菌株烟色曲霉分解壳聚糖能力检测5123液的配制51.2.4他了悬液的制备51.2.5制备原生质

2、体51.2.6原生质体的紫外诱变及再生51.2.7高产菌株的检出52结果和分析62.1烟色曲霉原生质体制备培养条件优化62.1.1菌龄对原生质体产率的影响62.1.2酶液pH对原生质体产率的影响62.1.3IW作用温度对原生质体产率的影响72.1.4酶作用时间对原生质体产率的影响82.2原生质体紫外照射剂量的确定92.3紫外诱变结果93结论10参考文献11致谢12烟色曲霉原生质体制备与紫外诱变本实验以烟色III備（Monacusfulginosus）为出发菌株，用混合酶制取原牛质体并对原牛质体形

3、成条件进行探讨，并进行紫外诱变选育。采用18h菌龄的菌丝体，使用pH为5.0的蜗牛酶（5mg/ml）+纤维索酶（5mg/ml）复合酶液，30°C下酶解2.5h,在该条件下原生质体浓度可达6.5X106个/mL,再生率为6.3%。在最佳紫外线照射时间90s下，突变株经筛选,得到一株降解壳聚糖的酶活显著提高、遗传性能稳定的诱变株。其酶活比出发菌株提高了1.23倍。关键词烟色曲霉；壳聚糖臨；原生质体；紫外诱变ProtoplastPreparationandBreedingofHigherEsterif

4、yingEnzymeActivitMutantsbyProtoplastMutagenesisofUltravioletIrradiationofMonacusfulginosusAbstractUsingMonacusfulginosusastheoriginalstrain,Studiedonthepreparationandregenerationconditionsofprotoplastsbymutagenesisofultravioletirradiation□Theresultss

5、howedthattreated18hcultureofMonascusruberwith5mg/mlsnailenzymeand5mg/mlCelluloseenzymewhosepHis5.(),theenzymolysistimewas2.5hours,theenzymolysistemperaturewas30°C,theprotoplastscouldreach6.5X106unit/mL,andtheregenerationratereachedupto6.3%。UnderUViiT

6、adiationtimeinthebestcaseforthe90s,Afterinitiallysievingandduplicatesieves,themutagenesisstrainwhichownincreasingenzymeactivityandtransmissibilitywasobtained□Itsesterifyingenzymecontentis1.23timeshigherthantheoriginalstrainoKeywordsMonacusfulginosus;

7、Chitosanenzymes;protoplast;ultravioletmutagenesis刖吞原牛.质体是指细胞壁被酶水解剥离后，剩下山原牛质膜包围的原牛.质部分原牛质体通常是由对数生长期的细胞制备

8、佃来的，代谢旺盛复制频繁生活力强对诱变剂的皱感性也强,诱变后易于形成单菌落而便于筛选；同时，原生质体还具有细胞壁再生能力，保持了细胞的全能性，可以按照常规的细胞诱变方式对其进行诱变，从而提高突变株的变异幅度，诱变效果更为理想⑴。1研究背景与意义HBuchman和Bonner在1959年首次报

9、道利用酶解破壁方法从粗糙脉他霉菌丝体释放原生质体以后，在其他各种真菌的原生质体制备和再生的研究陆续开展，极人丰富了人们对真菌细胞外表和其生理功能的知识，尤其对于20世纪70年代中期兴起的原牛•质体融合遗传育种手段在丝状真菌的应用起到了启动作用⑵。对于朋色Illi霉的原生质体制备、再生以及原牛质体诱变育种技术的研究也FI益增多。但是自然筛选的烟色曲孫产酶水平一般较低，无商业开发价值，而诱变冇种是一种简便易行而快速的选育方法。由于各种诱变剂对微生物的作用位点和方式不尽相同，因此，反复使丿IJ同一诱变