酵母种子液制备--论文稿

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1、从这里直接抄酵母菌液态发酵及酵母蔗糖酶提取和酶学性质研究摘要目的：掌握酵母菌种子的制备方法，通风搅拌罐液态发酵和超声波震碎酵母制备酵母蔗糖酶的工艺流稈探索，酵母蔗糖酶的酶学性质研究。方法：采用斜面培养基菌种接种，液态培养基培养。所得酵母菌种子液通过通风搅拌罐发酵。在发酵过程屮，以lh/次取样，分别观察在发酵过程屮不同时间段的pH值、溶氧量DO、牛物量的变化及其总糖的含量测定。酵母通过研磨，超声波震碎和梯度盐析分离纯化得酵母蔗糖酶液。结果：根据趋势线显示，随着时间推移，生物量有明显上升的趋势，溶氧量有所下降，pll值处于7的相对平稳状态。硫酸

2、苯酚法测得我小组总糖含量为12.47mg/mlo蔗糖酶在温度和PH缓冲液梯度中，酶学活性差异性较大（P〈0.01）。通过戊二醛的固定化，酶活力回收率为31.3%,相对活力为32.5%o结论：结合研磨和超声波震碎，提取酵母蔗糖酶的方法便捷，用硫酸镀梯度盐析提取率较高，适合小型提取工艺，对酶进行固定化可提高酶活力。关键字：酵母菌、液态发酵、蔗糖酶、酶学性质酵母是一种单细胞真菌，在有氧和无氧环境下都能生存，属于兼性厌氧菌。在有氧气的环境中，酵母菌将葡萄糖转化为水和二氧化碳。无氧的条件下，将葡萄糖分解为二氧化碳和酒精。可用于酿造生产。蔗糖酶又称转化

3、酶，可作用于B-1,2糖背键，将蔗糖水解为葡萄糖和果糖。由于果糖甜度高，约为蔗糖的1・36〜1.60倍，可为果葡糖浆的工业化生产提供新的方法。目前关于酵母中蔗糖酶提取纯化方面的研究较多，以甲苯自溶法最为常见。本实验采用离子交换层析和SDS-PAGE的方法从酵母屮提取纯化蔗糖酶,并对其基木性质进行了研究。通过不同提取方法的比较，为酵母蔗糖酶在食品工业中的应用和蔗糖酶基因工程产品的下游技术开发，提供了实验依据。1材料与方法1.1材料、试剂与仪器酵母(实验菌种)；葡萄糖、蔗糖、硫酸鞍、醋酸钠、Na2HPO4>MgSO4.KH2PO4.蛋白腺、琼脂

4、、NaOH、Na2C03等，乙酸、盐酸、氨水、琼脂、酒精均为国产分析纯；分光光度计、通风搅拌发酵罐、试管和烧杯若干、pll计、台式高速冷冻离心机(Neofuge23R,力康发展有限公司);超声波细胞粉碎机(JY92-IIDN,信仪)；恒温磁力搅拌器(90,上海亚荣生化仪器厂)。1・2实验方法1.2.1.1实验使用试剂配制(1)斜而培养基：按每100mL水加入5.0g葡萄糖，煮沸后加入2.0g琼脂，加热融化，补足水到lOOmLo分装、加塞、包扎，O.IMPa高压蒸汽灭菌20mino现配现用。(2)摇瓶种子培养基：蔗糖20.0g/L、蛋白淼5.

5、0g/L、Na2HPO44.0g/L.MgSO40,5g/LxKH2PO41.0g/L、pH5.0〜5.5,O.IMPa高压蒸汽灭菌20min。现配现用。(3)液体培养:蔗糖20.0g,蛋白5.0g,Na2HPO44.0g,MgSO40.5g,KH2PO4l.Og,加lOOOmL水加热，调pH5.0〜5.5,每50mL培养基加到250mL三角瓶，包扎，O.IMPa高压蒸汽灭菌20mino现配现用。(4)1%3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂:酒石酸钾钠100g溶于400mL蒸惚水,加热中依次加入NaOH5g,3,5-二硝基水杨酸5g,苯酚1

6、g,亚硫酸钠0.25g,搅拌至溶。冷却后定容至500n±,储于棕色瓶室温保存。(5)10%蔗糖溶液。(6)NaOHlmol/lo(7)乙酸缓冲液(0.05mol/ml)pH5・0。(8)显色液制备：将50ml浓硫酸缓缓加入10ml水中冷却至室温，加入0.6g苯酚晶体搅拌使其溶解配成显色液。(9)标准葡萄糖溶液制备：配置0.1mg/ml>0.15mg/mK0.2mg/ml>0.25mg/mk0.3mg/ml葡萄糖溶液。(10)1%3,5■二硝基水杨酸(DNS)试剂：酒石酸钾钠100g溶于400mL蒸僧水，加热中依次加入NaOH5g,3,5■二

7、硝基水杨酸5g,苯酚1g,亚硫酸钠0.25g,搅拌至溶。冷却后定容至500mL,储于棕色瓶室温保存。(11)1%戊二醛溶液：将4mL25%戊二醛溶液用上述Tris-HCl缓冲液稀释至lOOmLo(12)1mmol/L的N■漠代琥珀酰亚胺(NBS)溶液。121.2斜面菌种的培养将灭过菌的斜而菌种培养基摆成斜而放置一段时间看有无染菌，用未染菌的斜面培养基接种菌种，该操作在超净工作台上完成。将接种后的斜面试管培养基置于2LC的恒温培养箱中培养2d至斜面培养基上长满菌体。121.3液体培养将斜面菌体用接种环接种两环，在28°C的恒温摇床110r/m

8、in中培养2d。1.2.1.4酵母菌液态培养将制备的发酵液倒入通风搅拌发酵罐，再加培养过的种子液，开启进行发酵培养。1.2.1.5发酵过程各牛理指标的测定从开机开始计时，lh/次