抗菌活性石珊瑚真菌的分离、鉴定及活性产物的研究

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1、分类号：TS254.1密级：秘密2014.6至2016.6UDC：639.4学号：2111104322广东海洋大学硕士学位论文抗菌活性石珊瑚真菌的分离、鉴定及活性产物的研究李军指导教师：雷晓凌教授申请学位类别：农学硕士专业名称：食品科学研究方向：海洋生物资源利用学院名称：食品科技学院中国·湛江2014年6月抗菌活性石珊瑚真菌的筛选、鉴定及活性产物的研究摘要珊瑚代谢产物种类较多、结构新颖，与海绵和海洋微生物构成海洋天然产物的三大来源。珊瑚代谢产物活性物质的真正生产者可能是附着于珊瑚共附生的微生物。为寻找可产生比较新颖天然产物的共附生真菌，本论文以石珊

2、瑚共附生真菌为对象进行抗菌活性菌株的筛选、鉴定、活性产物以及发酵条件优化的研究。本文采用双层平板法，对60株石珊瑚共附生真菌进行抗菌活性筛选；通过形态学、分子生物学及生理特征相结合，对筛选出的3株抗菌活性菌株进行鉴定；并对3菌株代谢产物进行抗氧化活性、乙酰胆碱脂酶抑制活性及稳定性研究；结合活性分析、TLC分析以及HPLC分析，选择一株菌采用正交试验进行发酵条件优化。通过本论文的研究为珊瑚微生物资源以及活性物质的开发提供了一定的理论基础。本论文主要研究结果如下：（1）抗菌活性筛选。采用双层平板法，对60株石珊瑚共附生真菌进行抗菌活性筛选，优选出抗菌活

3、性较强菌落形态特殊且抗菌谱广的3株菌，编号为XWC21-10、XWC21-23和XWC14-13。（2）3株优选菌株的鉴定。通过对菌株XWC21-10、XWC21-23和XWC14-13的形态和培养特征观察、ITSrDNA序列分析，初步鉴定结果为：XWC21-10为土曲霉；尚未确定菌株XWC21-23种属；初步鉴定XWC14-13属于节菱孢属的一个新种。以菌落生长直径和菌丝生长情况为指标，对XWC21-23和XWC14-13进行最适温度和最适pH测定，确定XWC21-23最适温度25°C、最适pH8.0；XWC14-13最适温度30°C、最适pH7

4、.5。（3）3株优选菌株代谢产物的活性。抗氧化活性检测，以DPPH、超氧阴离子和羟自由基清除能力为指标，测定3株菌代谢产物的抗氧化能力，结果显示XWC21-10代谢产物抗氧化能力高于XWC21-23和XWC14-13。用改良的Ellman法测定代谢产物的乙酰胆碱脂酶抑制活性，结果显示菌株XWC21-10在浓度为5mg/mL时，对酶抑制率达到55.98%；菌株XWC21-23和XWC14-13均没有酶抑制活性。检测XWC21-10代谢产物抗菌活性稳定性，结果显示XWC21-10活性产物的热、pH和紫外稳定性较好。（4）XWC21-10发酵条件优化。利

5、用正交法，以代谢产物的抑菌活性为指标，初步确定菌株XWC21-10的最佳发酵培养基组成：1%麦芽糖、2%可溶性淀粉、0.02%NaH2PO4、0.06%K2HPO4；最佳发酵条件为：发酵最适pH7.0-7.5、最适温度28°C、发酵时间6d、接种量8%。综上表明，石珊瑚共附生真菌具有潜在新种资源，代谢产物具有较丰富的生物活性，部分菌株代谢产物活性明显，值得深入研究。关键词：石珊瑚，真菌，抗菌活性，鉴定，代谢产物IScreeningandIdentificationofScleractiniaFunguswithAntibacterialActivi

6、tyandResearchontheActiveProductsAbstractThemetabolitesofcoralhavemoretypesandalsoproducelotsofnovelstructureproducts.Meanwhile,marinenaturalproductswereallisolatedfromcoralspongeandmarinemicrobes.Somemarineactiveproductswereisolatedfrommarineorganismhosts.Inordertoscreenfungus

7、whichproducenaturalproducts,inthisdissertation,wefocusedparticularlyonstudiesontheactiveisolatescreening,identification,activeproductsandoptimizationoffermentationconditions.Themainresultsareasfollows:(1)Screeningofantimicrobialbioactivity.Sixtycoralfungusstrainswereusedtoassa

8、yantimicrobialbioactivityusingagardiffusionassay.Threeisolate