贝克曼ACCESS2说明书

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1、维生素B12检测步骤用ACCESS®免疫分析系统对人血清或血浆中维生素B12的定量检测内容表原理2标本采集3试剂和必须品3定标6质控6步骤6检测结果6开始检测7检测注意事项7参考文献9BeckmanInstruments,Inc.•Chaska,MN55318FormattedperNCCLSDocumentGP2-A3105303A©Copyright1998BeckmanInstruments,Inc.Page1of8原理检测原理Access维生素B12检测采用竞争结合的酶免疫分析原理，样品与碱性氰化钾和dithiothreitol单独加入反应管进行处

2、理使得与B12结合的蛋白降解并使维生素B12所有的形式转化为氰化维生素形式。经中和后加入标记有内因子的碱性磷酸酶酶结合物、包被了羊抗大鼠IgG的磁性颗粒和大鼠单抗，样品中的维生素B12与内因子标记的酶结合物抗体竞争结合磁性颗粒上的结合位点。在磁性分离区域进行分离和冲洗以去除未和固相结合的游离成分。化学发光底物，Lumi-Phos*530加入到反应管中，与反应体系中的内因子标记的碱性磷酸酶进行反应，发出的光量子被光电倍增管检测，光量子的强度与标本中的维生素B12含量成反比，对照仪器中储存的多点定标曲线即可得知样品中叶酸的含量。概述维生素B12是指钴胺素群中的

3、任何一种，他们是由一个四吡咯环围绕以钴原子为中心的结构组成，不同之处在于和钴原子连接的其它结构。血清中主要的形式是甲基钴胺素，主要的分子形式是5’-脱氧腺苷钴胺素（1）。氰钴胺（分子量1355）是最稳定的，通常用于测定血清钴胺素浓度的参考组分。钴胺素可从动物制品，如肉类、鸡蛋、牛奶和其它乳制品中得到，摄入过程中，钴胺素与一种在胃液内被称为内因子的蛋白质相结合，随后在回肠内被吸收。内因子是吸收过程中所必须的。一旦进入循环，钴胺素被吸收储存在肝脏，将视需要而通过B12结合蛋白（钴胺素转运蛋白）被释放入血浆中（1）。维生素B12是一种参与正常细胞生长和DNA合成

4、过程中重要代谢功能，起到至关作用的辅酶：1)合成蛋氨酸，以及2)将甲基丙二酸单酰辅酶A转化为琥珀酰辅酶A。缺少这种维生素将导致巨成红细胞性贫血以及最终将导致严重的神经症状（2，3）。巨成红细胞性贫血是由细胞增大和快速增生细胞的进行性下降来界定，包括骨髓细胞，首要形成的原因是DNA合成能力的下降。叶酸和维生素B12是蛋氨酸合成的反应途径中的组成部分，两者中任何一种的缺失都将影响该途径并导致相似的临床症状。此外该普通的代谢途径还将引起这样的结果，即维生素B12的无效会破坏叶酸进入红细胞，这将会导致即便叶酸的摄入正常也会引起红细胞内叶酸浓度的下降。由于上述原因，

5、在临床工作中一般应同时检测两种维生素，治疗的方法则视是哪一种维生素缺乏而定。维生素B12的缺乏可由多种原因引起(1，2，4)，最常见的原因是内因子缺乏，导致维生素B12不能从食物中被吸收。这种情况被称为恶性贫血，最常见于年龄超过50岁的人群中（3）。其他导致维生素B12缺乏的原因有胃切除术、由于外科切除后引起的吸收障碍以及各种细菌或炎症疾病影响到了小肠（1）。维生素B12的吸收量与有功能的小肠的长度有正相关关系，由于不正常的饮食而导致的维生素B12缺乏比较少见，只可发生在数年未有食用动物性食物情况下。维生素B12浓度的升高常见于孕期、使用口服避孕药和多种维

6、生素、骨髓增生性疾病如慢性粒细胞性白血病和髓单核细胞性白血病等。单纯性的维生素B12浓度的升高并不会引起临床疾病。标本采集A.血清或肝素抗凝血浆是推荐的样品类型。B.遵守国家委员会制定的临床实验室标准（NCCLS）推荐的以下血清标本处理、运行和储存步骤(5，6)：1.用真空采样管采集所有血液标本时须遵守常规注意事项。2.离心前使标本完全自然形成凝块。3.全程保证样品管的密闭状态。FormattedperNCCLSDocumentGP2-A3105303A©Copyright1998BeckmanInstruments,Inc.Page2of84.离心获得血

7、清后的两小时内，至少将500µl血清或肝素抗凝血浆转移到一个密闭的储存试管中备用。5.储存样品，保持样品管完全密闭，在室温(15到30°C)条件下不超过8小时。6.如果8小时内不能完成检测即应将标本放入2到8°C冰箱冷藏。7.如果24小时内不能完成检测或要转运标本，则应将标本放入-20°C冻藏。8.标本只能复融一次。C.标本最多含有10mg/dl(171mol/l)胆红素，9g/dl(90g/l)总蛋白以及含有相当于1800mg/dl(20.32mmol/l)甘油三酯的脂血标本不影响维生素B12浓度的检测。不要使用溶血标本。试剂和必须品BeckmanIns

8、truments,Inc.1000LakeHazeltineDri