不同截留分子量超滤膜包浓缩狂犬病病毒的效果_赵永强

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1、·1848·中国生物制品学杂志2013年12月第26卷第12期ChinJBiologicalsDecember2013，Vol.26No.12·技术方法·不同截留分子量超滤膜包浓缩狂犬病病毒的效果1211赵永强，杨丽，白春杰，刘瑞1.北京祥瑞生物制品有限公司，北京101407；2.辽宁依生生物制药有限公司，辽宁沈阳110131摘要：目的比较不同截留分子量超滤膜包浓缩狂犬病病毒（rabiesvirus，RV）的效果。方法将RV固定毒3aG-V株按0.01MOI比例接种至Vero细胞中，制备RV原液，分别用截留分

2、子量100KD和300KD的膜包超滤浓缩60倍，β-丙内酯灭活后，验证病毒液浓缩过程膜下液的病毒灭活效果；采用Sepharose4FF凝胶层析纯化灭活的病毒浓缩液，Lowry法测定病毒浓缩液和纯化液中的蛋白质含量；酶联免疫法测定病毒浓缩过程膜下液、浓缩液和纯化液中的RV抗原含量。结果100KD和300KD的超滤膜包均能有效截流RV，3次试验膜下液RV抗原含量均为0IU／ml，观察期内小鼠均健存。300KD膜包超滤的浓缩液和纯化液比100KD超滤膜包超滤的浓缩液和纯化液中杂蛋白含量低，抗原含量高。结论截留分子量

3、300KD的膜包比100KD的膜包更适用于RV的浓缩。关键词：狂犬病病毒；超滤浓缩；纯化；截留分子量中图分类号：R377+.50657.7+2文献标识码：A文章编号：1004-5503（2013）10-1848-03Concentrationofrabiesvirusbyultrafiltrationmembraneswithvariousmolecularweightcutoffvalues*，YANGLi，BAIChun-jie，LIURuiZHAOYong-qiang*BeijingXiangruiBi

4、ologicalProductsCo.，Ltd.，Beijing101407，ChinaCorrespondingauthor：ZHAOYong-qiang，E-mail：yq_008008@126.comAbstract：ObjectiveTocomparetheefficaciesofconcentrationofrabiesvirus（RV）byultrafiltrationmembraneswithvariousmolecularweightcutoffvalues.MethodsFixedRV3aG

5、-VstrainwasinoculatedintoVerocellsinaMOIof0.01.ThepreparedbulkofRVwasconcentratedby60foldsbyultrafiltrationmembraneswithmolecularweightcutoffvaluesof100and300KDrespectively，theninactivatedwithβpropiolactone.Theliquidflowingthroughthemembraneswasverifiedfori

6、nactivationefficacyofRVduringconcentration.TheconcentratedRVbulkafterinactivationwaspurifiedbySepharose4FFgelchromatography.TheproteincontentsinconcentratedandpurifiedRVliquidsweredeterminedbyLowrymethod.Theantigencontentsinliquidflowingthroughthemembranesa

7、swellasconcentratedandpurifiedRVliq-uidsweredeterminedbyELISA.ResultsRVwasinterceptedeffectivelybytheultrafiltrationmembraneswithmolecularweightcutoffvaluesof100and300KD.AlltheRVantigencontentsinliquidflowingthroughthemembranesinthreetestswere0IU／ml.Allthem

8、icesurvivedtheobservationperiod.However，theforeignproteincontentwaslower，whiletheantigencontentwashigherintheconcentratedandpurifiedRVliquidsby300KDultrafiltrationmembranethanthoseby100KDultrafiltratio