DIG Northern标记及杂交检测试剂盒中文说明书

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1、DIGNorthernStarterKitDIGNorthern标记及杂交检测试剂盒说明书版本：Version8.0（2010年8月）利用体外转录法进行地高辛标记的RNA探针合成反应，采用酶联免疫方法及即用型化学发光底物CDP-Star进行杂交分子的检测。2利用本试剂盒可进行10次标记反应，和10次杂交检测反应（10×10cm杂交膜）。产品目录号：12039672910试剂盒于-15~-25℃保存11.概况1.1说明书内容1.概况………………………………………………………………………………………21.1说明书内容………………………………………………………

2、…………………………21.2试剂盒组成…………………………………………………………………………………32.介绍………………………………………………………………………………………52.1产品概述…………………………………………………………………………………53.实验步骤和需要的材料…………………………………………………………………73.1实验开始前准备…………………………………………………………………………73.2实验流程…………………………………………………………………………………73.3DNA模板制备……………………………………………………………………

3、………73.4DIG-RNA标记……………………………………………………………………………93.5定量标记反应效率………………………………………………………………………103.6适用于DIGNorthernbolts的凝胶系统…………………………………………………123.7RNA转膜和固定…………………………………………………………………………133.8杂交………………………………………………………………………………………143.9免疫检测…………………………………………………………………………………153.10探针洗脱和重探……………………………………

4、……………………………………174附录………………………………………………………………………………………184.1疑难问题解决……………………………………………………………………………184.2参考文献…………………………………………………………………………………1921.2试剂盒组成管/瓶号标签成分及功能1aLabelingMix•40μl，即用型•5×标记混合物，含浓度优化的未标记核苷酸和DIG-11-UTP•用于线性化DNA模板的高效体外转录•澄清的粘性溶液1bTranscriptionBuffer•40μl，用于线性化DNA模板的高效体外转录•5

5、×转录缓冲液•澄清溶液2SP6RNAPolymerase•20μl，20U/μl•从DNA模板合成RNA3T7RNAPolymerase•20μl，20U/μl•从DNA模板合成RNA4T3RNAPolymerase•20μl，20U/μl•1从DNA模板合成RNA5Anti-Digoxigenin-AP,Fab•60μlfragments•750U/ml，Fab片段，羊源，结合了碱性磷酸酶•澄清溶液6DNaseI,RNasefree•20μl，10U/μl•用于转录反应后将DNA模板降解7CDP-Star,ready-to-use•20ml•碱性磷酸酶

6、化学发光底物8ActinRNAprobe,DIG-•反义链探针，588bplabeled•10ng/μl•在DIG标记RNA探针的定量实验中作为标准物质，以及杂交过程的质控样本9DIGEasyHybGranules•可制备成2瓶×100ml溶液•杂交液10Blockingsolution•2×100ml，用于化学发光检测过程•10×储液,•黄色，粘性溶液杂交反应所需的仪器和其他反应试剂请根据您的实验操作流程准备杂交反应所需的仪器和其他试剂，参见下表，请注意所有试剂应使用DMPC或DEPC处理的水配置：（说明书）杂交操作步骤设备试剂3.3DNA模板制备•H

7、ighPurePlasmidIsolationKit*3.3.1标准制备方法•酚/氯仿或33.3.2RT-PCR/PCR制备PCR反应仪•ExpandHighFidelityPCRSystem*•引物（正义链，反义链）•dNTPs各10mM3.4DIG-RNA标记•水浴设备•灭菌的双蒸水•冰/水•0.2MEDTA（pH8.0)，灭菌3.5定量标记反应效率•带正电荷的尼龙膜*•RNA稀释缓冲液•紫外交联设备•DIGWashandBlockBufferSet*•烘箱（120℃或80℃）或•洗涤缓冲液•马来酸缓冲液•检测缓冲液3.6适用于DIGNorthern

8、bolts的凝胶系统3.6.1含甲醛凝胶•电泳设备•10×MOPS,pH7.0（