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1、医学论文■体外扩增高纯度的人外周血来源的NK细胞的研究作者李晓红马健汪菲菲窦立萍李猛高春记【摘要】本研究探讨从人外周血中分选及扩增高纯度NK细胞的优化技术。先用miniMACS及阴性免疫磁珠分选方法从外周血单个核细胞PBMNC得到纯化的NK细胞随后在干细胞培液基条件下通过、和等细胞因了的不同组合将培养体系分为组、IL2IL12组、IL2IL15组、IL2IL15IL12组和对照组不加任何细胞因子分别培养15天每3天半量换液并补充细胞因子检测分选及扩增前后CD3-CD56NK细胞含量、扩增倍数及扩增

2、前后各组在不同效靶比下的杀伤率。结果显示经miniMACS阴性免疫磁珠分选后CD3-CD56NK细胞含量由分选前的11.19±5.25捉高到94.23±3.50。培养15天后除对照组CD3-CD56NK细胞纯度略下降外其余4组与扩增前无显著性差异P0.05o在、IL2IL12、IL2IL15、IL2IL15IL12培养体系中NK细胞扩增倍数分别为15.43±1.0819.87±3.8750.46±4.31和52.35±6.72均显著高于对照组6.14±1.0P0.01但IL2IL15与IL2IL1

3、5IL12组间未见显著差异P0.05。各组扩增的NK细胞对K562细胞的杀伤率均较扩增前增强在不同效靶比TIL2IL15UL2IL15IL12组对K562细胞的杀伤率显著高于其他组但两组间无显著性差异P0.05。结论经miniMACS免疫磁珠阴性分选得少fiNK细胞后应用IL2IL15培养条件是获得高纯度NK细胞的简单有效方法。【关键词】NK细胞miniMACS白介素2白介素12白介素15ExVivoExpansionofHighlyPurifiedNKCellsfromHumanPeripher

4、alBloodAbstractAdoptiveimmunotherapyusingallogeneicnaturalkillerNKcellsprovidestobeusefulinrecipientsafteritsapplicationhasbeenlimitedbytheinabilitytoobtainsufficientnumbersofpureNKcells・ThisstudywasaimedtooptimizetheexpansionofhighpurityNKcellsfromhu

5、manperipheralblood・FirsttheNKcellswereisolatedfromPBMNCbyusingminiMACSThentheisolatedcellswereculturedinSCEMStemlineHematopoieticStemCellExpansionMediumSigmasupplementedwith10humanABscrumCultureswerefedwithfreshmediaandcytokinesevery3daysandwereevalua

6、tedforcellexpansionphenotypeandcytotoxicityattheendofthecultureperiod・TheresultsshowedthatingroupIL2IL15andIL2IL15IL12cellswereexpanded50・46±4.31andhigherthanothersPO.OlbutnosignificantdifferencebetweenthemselvesP0.05・AndthepurityofCD3-CD56NKcellswaso

7、ver94inallgroupsexceptthecontrol.ThecytotoxicityofexpandedNKcellsculturedwithcytokineswassignificantlyhigherthanthestartingpopulationatdifferentE:TratioPO.OlalthoughthecytotoxicityofIL2IL15IL12groupwasslightlyhigherthanthatofIL2IL15groupbutnosignifica

8、ntdifferencebetweenthemselvesP0.05・ItisconcludedthathighpurityofNKcellscanbeefficientlyexpandedinculturewithIL2IL15.KeywordsNK细胞作为机体固有免疫的重耍组成部分是机体抗肿瘤、抗感染的第一道天然防线。随着对NK细胞牛物功能及活化机制的了解NK细胞在造血干细胞/骨髓移植的辅助治疗及肿瘤过继免疫治疗方面的作用倍受关注。最近在异基因造血干细胞移植屮发现供者异源反应性