《伯乐gm试验》ppt课件

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1、伯乐gm实验李丹GM试验原理GM试验的临床价值GM试验假阳性的情况GM试验假阴性的情况GM试验的优势和局限其他样本的gm实验与其他厂家比较GM试验检测的是半乳甘露聚糖（glactomannan，GM），主要适于侵袭性曲霉菌感染的早期诊断；半乳甘露聚糖是广泛存在于曲霉和青霉细胞壁的一种多糖，菌细胞壁表面菌丝生长时，半乳甘露聚糖从薄弱的菌丝顶端释放，是最早释放的抗原；本试剂盒采用ELISA夹心法，将EBA-2单克隆抗体包被于微孔内检测结合（结合物为过氧化物酶连接的抗体）到已激活微孔板上的抗体。加入EDTA的样本经过热处理(去除免疫复合物和

2、沉淀可能干扰实验的血清蛋白质，加入微孔板中。如果样本中有半乳甘露聚糖抗原，则形成单克隆抗体-半乳甘露聚糖-单克隆抗体过氧化物酶复合物。洗板去除没有结合的物质加入TMB,显蓝色，加入2M硫酸终止反应，酶标仪读数。1伯乐GM试验的原理严重粒细胞缺乏免疫功能低下（恶性肿瘤、血液病、尿毒症、艾滋病、器官移植、糖尿病）实体器官移植入住ICU血液肿瘤骨髓移植长期应用激素治疗慢性阻塞性肺病易感染人群无菌、无热源采血管，ep管，枪头，移液器金属浴加热模块，离心机支持1.5mlep管，支持450nm和620/630nm双波长的酶标仪，水浴锅必备耗材和仪

3、器曲霉细胞壁成分菌丝在组织中生长释放热稳定可溶性:血清，纤支镜灌洗液，脑脊液分子量：根据来源不同从10000到50000不等，属于高分子化合物半乳甘露聚糖ELISA指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。ELISA分为夹心法、间接法和竞争法夹心法常用于检测大分子抗原间接法常用于检测抗体竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原Elisa简介将具有专一性之抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体加入待测检体，检体中若含有待测之抗原，则其会与塑胶孔盘上

4、的抗体进行专一性键结洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一之一次抗体，与待测抗原进行键结洗去多余未键结一次抗体，加入带有酵素之二次抗体，与一次抗体键结洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果夹心法操作原理将已知之抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余之抗原加入待测检体，检体中若含有待测之一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结洗去多余待测检体，加入带有酵素之二次抗体，与待测之一次抗体键结洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色间接法操作原理将具有专一性之抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗

5、体加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结加入带有酵素之抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结洗去检体与带有酵素之抗原，加入酵素受质使酵素呈色竞争法操作原理GM可在患者临床症状出现前5-8d获得阳性结果曲菌定植时极少释放入血，因此有助于鉴别侵袭与定植；GM释放量与菌量成正比，可以反映感染程度；连续检测GM可作为治疗疗效的监测；在造血干细胞移植患者中的诊断敏感性高；参考值：I≥0.5为阳性。2血清GM试验的临床价值使用半合成青霉素尤其是哌拉西林/他唑巴坦，阿莫西林/克拉维酸；高剂量使用激素化疗的严重黏膜

6、炎患者谷类食物中的GM抗原通过肠道入血新生儿和儿童（双歧杆菌定植、食用乳制品）；血液透析；自身免疫性肝炎等；食用可能含有GM的牛奶等高蛋白食物。交叉反应真菌：青霉、拟青霉、隐球菌、头状地霉、组织胞浆菌。3GM试验假阳性的情况释放入血循环中的曲霉GM并不持续存在而是会很快清除；以前使用了抗真菌药物1.三唑类（降低GM水平）2.米卡芬净类（升高GM水平）病情不严重；非粒细胞缺乏的患者。4GM试验假阴性的情况优势：鉴别曲霉菌侵袭性感染与定植；早于临床症状和影像学异常5-8d；GM诊断侵袭性曲霉感染的敏感度高于G试验；血清中存在时间较短，可作

7、为疗效监测。5GM试验的优势和局限局限：阴性实验结果不能排除侵袭曲霉病的诊断。侵袭性曲霉病的高危病人，应当每周检测两次。没有使用新生儿样本来评估曲霉菌抗原检测试剂盒的性能。在慢性牙肿病（CGD）和Job’s综合征的患者中，检出率减低在侵袭性曲霉病人中，如果采取积极的抗真菌治疗，可能导致曲霉抗原检测试剂盒的灵敏度降低其他属的真菌如孢拟青霉，青霉，白地酶和组织胞浆有EBA-2单克隆抗体反应性等许多因素引起的假阳性和假阴性R5/R4大于等于1.5，R3/R4小于等于0.4两个R4之间差距不大于0.2结果判读G试验和GM试验的联合使用种属G试

8、验GM试验念珠菌属＋－镰刀菌属＋－隐球菌属－＋曲霉菌属＋＋青霉/拟青霉＋＋接合菌纲－－同时测定G试验和GM试验有助于早期诊断侵袭性真菌感染！纤支镜灌洗液（肺泡灌洗液）诊断曲霉菌在肺部是定植还是侵袭性生长，关键在于其是否合