细菌个体形态的观察谢茜

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1、细菌个体形态特征的观察细菌染色的原理1细菌涂片的制备2革兰氏染色3细菌涂片的制备4主要内容实验材料接种环、细菌分离培养物（上次实验平板）接种环接种针，酒精灯，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1本，载玻片4张，细菌分离培养物（上次实验平板），革兰氏染色液41.1细菌染色法★单染色法：只用一种染料染色，能清楚观察菌体大小、形态与排列，不能鉴别细菌。★复染色法（鉴别染色）：采用两种以上的不同染料进行先后染色，可将细菌染成不同的颜色，以便鉴别细菌。※抗酸染色:用于检查结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌等抗酸性细菌(※一些一旦用某些方法染色

2、后，能够抵抗酸性酒精脱色的细菌)，阳性者为红色。※特殊染色：荚膜染色，芽胞染色，鞭毛染色，极体染色（用于白喉杆菌异染颗粒染色）。1.1细菌染色法结核分枝杆菌抗酸染色麻风分枝杆菌抗酸染色产气荚膜梭菌荚膜Hiss染色破伤风梭菌芽胞芽胞染色变形杆菌鞭毛Leifson染色白喉棒状杆菌异染颗粒Albert染色1.2革兰氏染色法革兰染色法是丹麦内科医生ChristainGram于1884年创立的一种细菌复染色方法，已有130多年的历史，仍在广泛使用。2涂片的制备无菌操作灭菌接种环2涂片的制备↑细菌合适↑细菌较多①接种环取盐水3ul×2滴,水滴

3、间距小于2cm。②取菌苔少许（1mm小菌落半个）与盐水混匀，涂成大于1cm2均匀涂膜。③涂毕→环移至涂膜中央侧立，待环内菌膜破裂，接种环烧灼灭菌。无菌操作2涂片的制备固定Fixation涂片smear干燥dry①手持载玻片一端，涂膜朝上，两个涂膜快速通过火焰外层3次，时间2～3秒钟。②促使菌体蛋白质凝固，固定在载玻片上，以免染色水洗的时候，细菌被水洗掉。初染：结晶紫染液染1min水洗，甩干媒染：卢戈氏碘液染1min水洗，甩干脱色：酒精脱色约30s水洗，甩干复染：复红染液染30s水洗，甩干印干油镜观检染色关键步骤！3革兰氏染色的方法

4、和步骤A.油镜放入光路之前，一定要在标本的观察部位上加一滴浸油。B.旋转物镜转盘，使油镜进入光路，用微调旋钮对好焦距。C.如果浸油内有气泡，会影响观察，可稍微旋转物镜转盘，使油镜来回通过1～2次浸油，排除油内气泡。4100倍油镜的使用自行操作琼脂平板分离的浓汁标本EMB平板分离的粪便标本白金黄粉红紫黑实验结果用普通平板，从浓汁标本中分离得到金黄、白色两种菌落，经革兰氏染色后，显微镜油镜下均为紫色的球状，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的G+葡萄球菌。葡萄球菌(电镜)金黄、白色形态与染色(油镜)酸葡萄金黄、白色菌落特征黄色白色用伊红美

5、蓝平板,从粪便标本分离、获得紫黑色和粉红色半透明两种菌落。革兰氏染色后，在显微镜下，均为红色的杆菌，散在排列，为典型的G-的杆菌。杆菌(电镜)紫黑、粉红细菌的形态与染色(油镜)紫黑紫黑、粉红菌落特征粉红实验结果生物安全警告BIOHAZARD本次实验操作，可产生几十至几百个微生物气溶胶颗粒。气溶胶粒径＞100um沉降很快,＜50um在0.4s内扩散开,＜5um通过呼吸道直接到达肺泡。Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。实验时应坐稳，很专注，不分心，在火焰周围10～20

6、厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话，以免感染病原菌。1、细菌的形态学分类、基本结构和特殊结构2、掌握细菌涂片标本的制备3、掌握革兰染色法的原理及关键步骤4、掌握油镜的使用5、无菌操作思考：如何区别致病和非致病的G+球菌、G-杆菌？内容小结THANKS