实训二细菌形态的观察

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1、实训二细菌形态的观察微生物与发酵工艺细菌的形态微小(以µm计)，借助于放大400～1000倍的光学显微镜，可以观察到它们个体的基本形态——球状、杆状和螺旋状，其中杆状细菌最为常见，球菌较少，螺旋状的最少。此外尚有极少数细菌为星状，而有的具柄，有的具鞘，有的带附属物。近年来在高盐、高热、高酸等极端环境中还发现了一些形态更为特殊的细菌，如三角形、方盒形、圆盘形、叶状等形态特异的古生菌。细菌的形态是由多基因调控的，除诱变因素以外，在正常的外界环境中，细菌的形态具有稳定的遗传性。亲代与子代的形态基本一致。单个细菌个体微小，肉眼不可见。但是由一个细菌细胞用无性

2、繁殖所产生的数以亿计的子细胞聚集在一起而形成的群体——菌落，在营养琼脂固体培养基上即可目测，不同细菌的菌落形态各异(参阅实训一的结果)。将多个细菌菌体接种在营养琼脂斜面上，所生长出的细菌群体称为菌苔。不同细菌经直线接种在营养琼脂斜面上，会出现诸如丝状、带刺状、小突起状、念珠状、薄膜状、扩展状、树状、假根状等非沿直线生长的各种形态。细菌在液体培养基中静止培养，在液面会出现絮状、环状、浮膜状和膜状等形态。而振荡通气培养，则每个菌体均匀生长、繁殖，数目增加，菌液混浊。一、实验目的1.认识细菌的基本形态。2.学习掌握细菌压滴片及悬滴片的制作方法。1.压滴法将

3、细菌悬液滴于载玻片中央，加上盖玻片置于显微镜下观察。此法是研究微生物形态最简单、最基本的方法之一。2.悬滴法将细菌悬液滴于盖玻片中央，翻转，置于凹玻片的凹窝中央，由于细菌不受盖玻片的压力影响，所以此法常用于观察并区别细菌运动的方式，也可观察细菌的繁殖方式，及孢子萌发等。3.利用暗视野显微镜的观察。利用黑暗背景、被检物构成亮点的特性，可进行细菌运动方式的观察。二、实验原理1.菌种金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)大肠杆菌(Escherichiacoli)普通变形杆菌(Proleusvulgaris)枯草芽孢杆菌(Bacillus

4、subtilis)黏质沙雷氏菌(Serratiamarcescens)细菌三种基本形态的染色片2.用具显微镜、载玻片、凹玻片、接种环、纱布、镜头纸、镊子、盖玻片、特种铅笔、无菌水、凡士林油、火柴、酒精灯、玻片架、香柏油、二甲苯等，722s型分光光度计，0.85％NaCl溶液。三、实验材料和用具1.压滴标本制作①取—清洁载玻片，放在酒精灯的右侧桌面上，用记号笔在玻片右侧注明观察菌体的名称。②点燃酒精灯，取一小滴清洁的无菌水放于玻片中央。③用无菌操作取出少许菌苔，于玻片水中，涂匀(见图2-3)。④用镊子取清洁的盖玻片。由一端与玻片的菌液接触，徐徐放下盖玻

5、片，注意避免产生气泡。⑤将压滴标本放于显微镜下观察。四、实验方法无菌操作制片示意图1一接种环火焰灼烧灭菌；2一在火焰3cm处拔出硅胶泡沫塞(或棉塞）3一斜面管口火焰灼烧灭菌，4一挑取菌苔5一从斜面试管中取出接种环，管口火焰灼烧再次灭菌，6一在火焰3cm处塞上硅胶泡沫塞(或棉塞)7一涂片8一再次火焰灼烧接种环灭菌四、实验方法2.悬滴标本制作①取清洁的凹玻片和盖玻片各一片；②用火柴杆取少许凡士林涂于盖玻片的四角；③在盖玻片中央用接种环蘸取一小滴无菌水，然后用无菌接种环取少许菌苔在水滴上轻沾一下，注意水滴大小要适宜，放菌苔时不要使水滴破散；四、实验方法④将

6、凹玻片翻转向下，使凹窝中央对准盖玻片中央液滴，然后轻压。使凹玻片与盖玻片粘合紧密，以免蒸发，然后很快将凹玻片翻转，使盖片向上。⑤将制作好的悬滴片置于显微镜下观察。四、实验方法压滴标本四、实验方法压滴标本制作过程1.在油浸物镜下观察细胞三种基本形态的染色片。2.用无菌操作制金黄色葡萄球菌的压滴片，置油镜下观察。3.用无菌操作制大肠杆菌的悬滴片，置油镜下观察细菌的运动。五、实验内容1.绘图表示细菌的三种形态。2.试述油镜的使用方法。3.描述所观察的细菌菌苔形态。4.报告所检测的大肠杆菌菌悬液的OD值。六、实验报告1.怎样观察细菌形态?细菌未染色时，用油镜

7、观察有何困难?2.试述无菌操作的步骤及其要领。七、思考题