实验一二三细菌染色

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1、实验一、细菌简单染色一、实验目的与要求1.学习微牛物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色方法2.掌握油镜的使用方法和无菌操作技术二、原理1.简单染色法是利用单一染料対细菌进行染色的一种方法。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。2.常用碱性染料进行简单染色，因为：在屮性、碱性或弱酸性溶液屮，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分了的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。常用作简单染料有：美蓝、结品紫碱性石炭酸复红

2、等。三、器材1.菌种金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis)2•染色剂：石炭酸复红染液3•仪器及具他用具显微镜酒精灯载玻片接种环双层瓶擦镜纸蒸懾水四、操作步骤1•涂片収两块载玻片，各滴一小滴蒸僻水于玻片中央，用接种环以无菌操作分别从金黄色葡萄球菌和苏云金芽胞杆菌平板上挑取少许菌苔于水滴中，混匀成薄膜。注意：载玻片无油迹；滴蒸饰水不要A多；涂片要涂抹均匀2.干燥室温自然干燥3.固定涂面朝上，通过火焰2-3次，热固定温度不宜过高，以免改变或破坏细胞形态。

3、4.染色滴加石炭酸复红染液于涂片上，染色约1-2分钟5.水洗用自来水冲洗，直至涂片上流下的水为无色为止。注意：不要直接冲洗涂面，使水从载玻片的一•端流下。水流不宜过大，以免涂片薄膜脱落6.干燥自然干燥或用吸水纸吸干7.镜检涂片必须完全干燥后才能用油镜观察五、实验报告根据观察结果，绘出两种细菌的形态图。实验二、革兰氏染色法一、目的要求1.学习并拿握革兰氏染色法、荚膜染色法2.了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性二、基本原理1•革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram氏创立的，是细菌学屮最重要的鉴别染色法。

4、)2革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和纽成不同决定的。当结晶紫初染示，像简单染色一样，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色，碘液作为媒染剂，它能与结晶此结合成结晶紫一碘复合物，从而增强了染料与细菌的结合力，当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果不同，G+细菌的细胞壁主要由聚糖组成网状结构，壁厚、类脂质含量低，用乙醇脱色时细胞壁脱水，使肽聚糖层网状结构孔径缩小，透性降低,从而使结晶紫一碘复合物不易被洗脱何保甜在细胞内，经脱色和复染后仍保阳初染剂的蓝紫色。G—细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含址高，当脱色处

5、理时，类脂质被乙醇溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫一碘复合物比较容易被洗脱出來，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂红色。三、实验器材1•菌种大肠杆菌JEcoll}枯草芽胞杆菌(Bacillussubtilis)巨大芽胞杆菌JBacillusmegatathium)2染色剂革兰氏染色液3.仪器及用具显微镜酒精灯载玻片接种环双层瓶擦镜纸蒸镉水四、实验步骤1.制片常规涂片、干燥、固定2.初染滴加结晶紫，染色1〜2分钟，水洗。3.媒染用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1分钟，水洗。4.脱色吸水纸吸干玻片上的残水，用滴管流加95%的乙醇脱色，直

6、至乙醇无紫色，立即水洗。脱色时间约20〜30秒。5.复染用番红液复染约2分钟，水洗。6.镜检丁燥后，用汕镜观察菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌，被染成红色的为革兰氏阴性菌。五、实验报告1•列表简述2株细菌的染色结果(说明各菌的形状、颜色和革兰氏染色反应。2.你认为在革兰氏染色过程屮最关键的环节是哪一部，为什么？实验三、细菌芽抱染色法一、目的要求1.学习并掌握芽砲染色法2.初步了解芽胞杆菌的形态特征二、实验原理芽砲染色的基本原理：用着色力强的染色剂孔雀绿染色后，被染色的芽他一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽抱仍

7、保留初染剂的颜色，而菌体和芽泡囊被染成复染剂的颜色，使芽泡和菌体更易于区分。三、实验器材1•菌种苏云金芽砲杆菌（Bacillusthuringiensis}9枯草芽抱杆菌（Bacillussubtilis）2.染色剂饱和孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液3•仪器及用具显微镜酒精灯载玻片接种环双层瓶擦镜纸蒸饴水四、实验步骤1•制片常规涂片、干燥、固定2.染色加3〜5滴饱和孔雀绿染液于涂片上，维持10分钟以上3.水洗用缓流口来水冲洗，直至流出的水为无色为止4.复染用番红染液复染2分钟5.水洗用缓流水冲洗，吸干6.镜检干后用油镜观察：

8、芽砲为绿色，芽砲囊及营养体为红色五、实验报告绘制苏云金芽泡杆菌及枯草芽泡杆菌图（注意芽饱的形状、着生位置及芽泡囊的形状特征）。