大鼠降钙素（CT）酶联免疫分析

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1、大鼠降钙素(CT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：48T20ng/L-480ng/L使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本屮降钙素(CT)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠降钙素(CT)水平。用纯化的大鼠降钙素(CT)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔屮依次加入降钙索(CT),再与HRP标记的降钙素(CT)抗体结介，形成抗体■抗原■酶标抗体复合物，经过彻底洗涤示加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和

2、样品中的降钙素(CT)呈正相关。用酶标仪在450mn波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中大鼠降钙素(CT)浓度。试剂盒组成120倍浓缩洗涤液20mlX1瓶7终止液3mlX1瓶2酶标试剂3mlXl瓶8标准品(960ng/L)0.5mlXI瓶3酶标包被板12孔X4条9标准品稀释液1.5mlXI瓶4样品稀释液3mlXl瓶10说明书1份5显色剂A液3mlX1瓶11封板膜2张6显色剂B液3mlXl/瓶12密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提取，提取按和关文献进行，提収后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于・2

3、0°C保存，但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1.标准品的稀释：木试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试悸中进行稀释。480ng/L5号标准品150pl的原倍标准品加入150pl标准品稀释液240ng/L4号标准品150

4、il的5号标准品加入150)11标准品稀释液120ng/L3号标准品150)11的4号标准品加入150)11标准品稀释液60ng/L2号标准品150(11的3号标准品加入150(11标准品稀释液30ng/L1号标准品150pl的2号标准

5、品加入150pl标准品稀释液2.加样：分別设空白孔(空白対照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50卩1,待测样品孔中先加样品稀释液40pl,然麻再加待测样品10pl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。1.温育：用封板膜封板后宜37°C温育30分钟。2.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸镭水20倍稀禅后备用3.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。4.加酶：每孔加入輛标试剂50卩1,

6、空白孔除外。5.温育：操作同3。6.洗涤：操作同5。7.显色：每孔先加入显色剂A50M，再加入显色剂B50pl,轻轻震荡混匀，37°C避光显色15分钟.8.终止：每孔加终止液50卩1,终止反应（此时蓝色立转黄色）。9.测定：以空白空调零，450mn波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：准备试剂，样品和标准品计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或川标准物的浓度与OD值计算出标准Illi线的直线回归

7、方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏坏境屮取出应在室温平衡15・30分钟后方町使川，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋屮保存。2•浓洗涤液可能会冇结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。1.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。2.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本0D值人于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀禅液

8、稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）o3.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。4.底物请避光保存。5.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酚标仪读数为准.6.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。7.木试剂不同批号纟fl分不得混用。8.如与英文说明书冇异，以英文说明廿为准。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8°Co2.有效期：6个月