考点加强课6限制酶的选择与目的基因的检测与鉴定

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1、考点加强课6限制酶的选择与目的基因的检测与鉴定1.栾树适合牛长于石灰石风化产牛的钙基土壤中，抗恶劣环境的能力强，因此常用于矿区废弃地恢复过程中的种植。为了增加栾树的耐旱性，某科研所将耐旱基因导入栾树中，流程图如下。回答下列相关问题。Ti质粒氨节青霉素抗性基因HindIII13atnHIBamWIBantHI+H加dmBamHI+HuhIIII⑴H加dill和BamHI切割部位是Ti质粒的。①被HmdlU和BamHI酶切后，能产生种DNA片段；②过程为；③、④、⑤过程的基本原理是o(2)图中将目的基因导入栾树细胞的方法为,通过这种方法，使目的基因进入植物细胞，并将其插入

2、到植物细胞中上，使其遗传特性得以稳定维持和表达。(3)矿区废弃地的土壤条件极其恶劣，因此在恢复矿区的生态环境时，人们采取的措施包括、多层覆盖、特殊隔离、土壤侵蚀控制、植被恢复工程等，其中，关键在于植被恢复，以及为植被恢复所必需的的重建。解析(1)分析图示，使用的运载体是Ti质粒，因此限制酶切割的部位是T-DNA,以便目的基因连接在Ti质粒的T-DNA上。①中含有两个BamHI切割位点，含有一个//mdlll切割位点，所以用这两种酶切割后产生4种DNA片段。②过程为构建基因表达载体。③、④、⑤过程为植物组织培养，原理是植物细胞的全能性。(2)图中将目的基因导入受体细胞的

3、方法为农杆菌转化法，T-DNA将目的基因整合到细胞染色体的DNA上。(3)矿区废弃地由于土壤条件极其恶劣,为加速恢复矿区生态环境，人们采取的措施有人工制造表土、多层覆盖、特殊隔离、土壤侵蚀控制、植被恢复工程等。其中，关键在于植被恢复，以及为植被恢复所必需的土壤微生物群落的重建。答案(l)T-DNA4构建基因表达载体植物细胞的全能性(2)农杆菌转化法染色体的DNA(3)人工制造表土土壤微生物群落1.(2016-天星教育大联考)如图所示为培育转基因抗虫棉的两种思路。重组质粒②

4、EcoRISmaIBamHI终止子目的基因tSmaISma1EcoRISmaIBamHI人」动子

5、棉株1亠单倍体苗亠外植体亠受体细胞亠棉株22棉株3-腓思路1EcoRISmaIBatnHI终止FEcoRISmaIBamHI启动子匚目的基因tSnia1SmaIY重组质粒棉株1外植体一受体细胞一棉株4一筛选应用思路2请冋答下列问题：(1)图中的目的基因应为基因，与思路2相比思路1的优点是(2)分析题图可知，不宜选择SwI这种限制酶切割含目的基因的DNA分子，理由是o将目的基因和质粒拼接在一起，所用的一类酶屮酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。(3)图中过程①得到的完整的重组质粒，除了图中标出的特殊DNA片段外，还应有

6、;过程②采用较多的方法为,用到的质粒为:过程③常用的试剂为o答案(1)抗虫筛选出的目的植株能稳定遗传⑵SmaI可能会破坏目的基因Eco〃DNA连接(3)标记基因和复制原点(不答复制原点也正确)农杆菌转化法Ti质粒秋水仙素2.(2017^河北唐山检测)如图为培育转基因山羊生产人0■酪蛋口的流程图。请回答下列问题：表达人B-酪贵白的转基因山羊（人0-酪蛋白基因］（表达载体］（重组人B-酪蛋白基因矜达载体'显微注身1普通山羊）弓受話卵）_-（1）过程①为基因工程中的,人卩■酪蛋白基因为,可从基因文库中获取，基因文库包括o（2）过程②指的是胚胎移植过程，一般选取的胚胎进行胚胎

7、移植，不选用原肠胚吋期。（3）过程③为加速转基因动物的繁育，可以采用、等方法。（4）过程④指的是目的基因的表达，包括两个阶段，在分子水平上检测目的基因是否在转基因山羊体内成功表达的方法是o答案（1）构建基因表达载体目的基因基因组文库和部分基因文库（2）桑權胚时期或囊胚吋期（3）胚胎分割移植体细胞核移槓（或克隆技术）（4）转录与翻译抗原一抗体杂交1.（2016-江西校级一模）凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。从牛胃液中分离到的凝乳酶以催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞屮。（1）科学家已经测出该酶的氨基酸序列，因此可以通过方法

8、来获取目的基因，获得目的基因后，常利用技术在体外将其大量扩增。⑵构建重组DNA分子（如图所示）最好选用限制酶，理由是EcoR1EcoR1Pst1~F~TBamH1BamH1外源DNA（3）工业化生产过程中，最初多采用重组大肠杆菌或芽砲杆菌生产凝乳酶，现多釆用重组毛霉或重组的酵母菌来生产，毛霉或酵母菌作为受体细胞的优势是（4）硏究发现，如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是。解析（1）由于已经测出该酶的氨基酸序列，故可推测出相应的RNA和DNA的序列，因此可以通过化学合成