再障患者B19病毒抗原检测及临床意义

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1、再障患者B19病毒抗原检测及临床意义作者：曹玉红张国成许东亮【关键词】再生障碍性贫血关键词：再生障碍性贫血;人细小病毒B19;免疫荧光技术0引言人细小病毒B19(B19)是与人类疾病密切相关的小DNA病毒，与急性再生障性贫血(AAA)的关系屡有报道[1]•为探讨B19抗原检测用于诊断AAA患者B19感染的价值及其临床意义，我们应用间接免疫荧光法(IIF)对21例AAA患儿骨髓进行B19抗原检测.1对象和方法1.1对象病例组21例，为1998-01/1999-12在我院儿科和血液科住院的急性再障患者，年龄3~13岁，平均年龄6岁3月，均符合第6版《实用儿科学》再障诊断标准•

2、所有患儿均采集新鲜骨髓液0.2mL于无菌肝素抗凝管,-20°C冰箱冻存，同时收集骨髓涂片，冷丙酮固定15n)in,-20°C密封保存待检.1.2方法1.2.1IIF法检测再障患者骨髓涂片B19抗原鼠抗B19病毒特异性mAbIgG（一抗）购自国际生化公司，羊抗鼠FITC标记的IgG（二抗）购自华美生物工程公司，试验步骤参见文献[2]•①于待检骨髓涂片上加一抗放于湿盒内4°C过夜.②PBS-5gL-lBSA液漂洗3次，每次5min,吹干.③加荧光二抗，湿盒内37°C保温30~60min.④PBS-5g1-1BSA液漂洗2次，每次5min,用蒸憾水洗1次•⑤用500gL-1缓冲

3、甘油封片，荧光显微镜检.同时设立阳性对照及阴性对照.1.2.2巢式PCR检测骨髓B19-DNA巢式PCR所用引物、DNA提取、PCR反应具体步骤及结果观察参见文献[3]・2结果21例AAA患者骨髓中有3例B19抗原阳性，其屮1例呈弱阳性，另2例呈强阳性，黄绿色阳性荧光信号主要位于细胞膜及胞质周边，呈点状分布，阳性对照骨髓片呈阳性，阴性对照呈阴性;B19-DNA阳性7例;B19抗原阳性标本DNA亦阳性.B19抗原检测与巢式PCR相比，灵敏度为43%,特异度为100%,总符合率为81%,阳性预告值为100%,阴性预告值为78%.3讨论自1981年Pattison证实B19感染

4、诱发镰状细胞贫血患者再障危象以来，B19感染与再障的关系H益引起广大学者关注.B19感染不仅可引起溶血性贫血患者再障危象，免疫抑制或缺陷患者纯红细胞再障，而口免疫功能正常宿主B19感染引起再障的报道亦愈来愈多.目前国内已建立卩CR及巢式PCR技术，并从包括AAA在内的多种疾病患者临床标本中检出B19-DNA，证明PCR具有高度灵敏性和特异性•但IIF法用于AAA患者骨髓B19抗原的检测，国内报道甚少•我们的研究结果说明再障患者B19抗原检测的敏感性低于DNA,用TTF诊断B19感染时需同时检测B19-DNA・目前，B19引起急性再障的机制尚未完全阐明•许多学者认为与B19

5、细胞受体（即血型P抗原）介导的细胞（尤其是红系细胞）毒作用及免疫损伤有关•我们从AAA患者骨髓中检出3例B19抗原阳性，B19抗原主要位于细胞膜及胞质周边，与国外研究结果基木一致，提示旳9对骨髓细胞的直接毒性作用是导致AAA患者血细胞减少的主要原因Z-,充分说明人类骨髓为允许B19复制的细胞体系，为B19休外培养提供了实验依据；B19-DNA阴性骨髓片中尚有4例B19抗原阴性，考虑与IIF检测敏感性较低有关，此外我们考虑这些患者血细胞减少主要由免疫机制所介导，B19并未在骨髓中繁殖或病毒产量较少•总之，免疫荧光技术虽然敏感性较低，但简便、快速，有助于了解B19在细胞内的分

6、布以及进行半定量研究，推测B19致病机制，从形态学角度为B19感染诊断提供更直观的信息.参考文献：[1]MustafaMM,McclainKL・Diversehematologiceffectsofpar-vovirusB19infection[J]・PediatrClinNorthAm,1996;43(30):809-821.[1]VassiasI,PerolS,CoulombelL.Ansituhybridizationtech-niqueforthestudyofB19humanparvovirusreplicationinbonemarrowcellculture

7、sLJ].JVirolMethods,1993;44(2-3):329-338.[2]ChengSQ,ZhangGC,XuDL.InvestigationofparvovirusB19DNAinserumofpatientswitharthritisbynestedPCR[J].Di~siJunyiDaxueXuebao(JFouthMilMedUniv),1999;20(9):812-814.