实验7-液相色谱法测雪碧、可乐中的咖啡因含量

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1、液相色谱分离测定雪碧、可乐中的咖啡因【摘要】色谱法是一种分离和分析方法，本实验采用的是液相色谱中的反相分配色谱，反相色谱的固定相极性小于流动相，样品根据在固定相和流动相中的分配系数不同而进行分离。通过标進样品的保留吋间进行定性，以峰血积对浓度绘制的工作曲线定量测定可乐和雪碧中的咖啡因。【关键字】液相色谱反相色谱咖啡因外标法[Summary]tKeywords1Chromatographyisaseparationandanalysismethod.Thisexperimentusesreversed-phasedistributionchro

2、matographyinliquidchromatography•Thereversed-phasechromatographyhasasmallerstationaryphasethanthemobilephase.Sampleshavedifferentdistributioncoefficientsinthestationaryphaseandthemobilephase.Andseparation.QuantitativedeterminationofcaffeineinColaandSpritewasperformedbyquant

3、ifyingtheretentiontimeofthestandardsampleandbyplottingthepeakareaversustheconcentrationplotted・liquidchromatographyreversedphasechromatographycaffeineexternalstandardmethod【实验目的】1、学习液相色谱仪的基本原理，尤其是反相色谱的基本规律，构成和使用方法2、了解高效液相色谱仪（以安捷伦1260为例）的结构及基本操作；3、掌握色谱的基本定性、标准曲线定量方法。【基本原理】•原

4、理概述：本实验采用的是液相色谱中的反相分配色谱，反相色谱用的是非极性填料分析柱（如0DS-C18）,流动相是极性较强溶剂（如甲醇和水），样品根据在固定相和流动相中的分配系数不同而进行分离。通过标准样品的保留时间进行定性，以峰面积对浓度绘制的工作曲线定量。•色谱法：是一种分离和分析方法，在分析化学、有机化学、生物化学等领域有着非常广泛的应用。固定相：固定不动的相，可以是固体，也可以是涂在固体上的液体，由此又可将气相色谱法和液相色谱法分为气-液色谱、气-固色谱、液-固色谱、液-液色谱。流动相：不断流过固定相的相，可以是气体、液体，由此可分为气相色

5、谱法（GC）和液相色谱法（LC）。原理：利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同进行分离。使用外力使含有样品的流动相通过一固定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。当流动相中携带的混合物流经固定相时，混合物屮的各组分与固定相发生相互作用。由于混合物屮各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随看流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序rh固定相中先后流出。与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。・高效液相色

6、谱：在气相色谱和经典色谱的基础上发展起来。现代液相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。不同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率和实现了自动化操作。•咖啡因：又称咖啡碱，属黄瞟吟衍生物，化学名称1,3,7-三甲基黄瞟吟，是由茶叶或咖啡中提取出的一种生物碱。它能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋。咖啡屮含咖啡因约1.2%〜1.8%,茶叶小约为2.0〜4.7%。可乐饮料、APC药片均含咖啡因。【仪器与试剂】1・仪器：Agilent1260型液相色谱仪：真空在线脱气装置；四元梯度泵；二极管阵列检测器；ODS-C18柱;超声器。图1液相色谱仪器简图2.

7、试剂：甲醇（色谱纯）；水（超纯水）；咖啡因标样5份；可乐；雪碧。【实验步骤】1.确定实验条件打开计算机，等计算机启动完毕后，依次打开输液泵、真空在线脱气装置、柱温箱、检测器的开关。通讯完毕后，设定操作条件。流动相：甲醇/水=60/40；总流速0.8mL/min设定在254nm波长下进行检测，柱温30°C,检测时间6min0流动相的比例可以根据实验内容的需要在控制单元屮修改。2.样品制备将可乐、雪碧倒入烧杯后放在超声波仪屮超声脱气，去除雪碧、可乐屮溶解的空气以及大量二氧化碳气体。将脱气后的可乐溶液稀释5倍后，通过0.45pm的滤膜过滤，转移至定

8、量管中备用。将脱气后的奶茶溶液用甲醇稀释5倍后、离心，取上层清液通过0.45屮n的滤膜过滤后，转移至定暈管屮备用。准确称量10mg的咖啡因用甲醇溶解于25ml的容量